概述（Summary）icon

储存条件（Storage）

储存于 -20°C，保质期12个月。

状态（Form）

Liquid

储存溶液（Buffer）

20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol

表达宿主（Host）

大肠杆菌

酶切位点

PNGase F几乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-连接糖 (x = H 或寡糖) 。

分子量

36kDa

纯度

>95% as determined by SDS-PAGE quantitative densitometry by Coomassie Blue Staining.

比活性

1,800,000 U/mg

酶活单位定义

1个酶活力单位指在10ul的反应体系中，37℃条件下1小时从10ug变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量定义为一个活性单位（U）。

酶切反应条件

37℃ ，酶切反应1h，每1ug酶可以酶切10ug底物。（酶与底物的质量比是本公司根据所用底物糖基化程度检测得到，仅供参考）

使用方法（Standard Operating Procedure）icon

1. 在变性条件下进行SDS-PAGE的蛋白质去糖基化 ① 在水中加入50μg目标糖蛋白（或低离子强度的相容缓冲液）至最终体积为12μl。 ② 加入1μl 的5％SDS。 ③ 加入1μl的 1MDTT。 ATAGENIX LABORATORIES PNGase F Catalog Number:ATE00005 ④ 在95℃加热5min使样品变性。 ⑤ 在室温下冷却5min。 ⑥ 加入2μl的0.5M磷酸钠缓冲液（pH 7.5）。如果pH在PNGase F（pH 6-10）范围内，可以使用 其他缓冲液。 ⑦ 加入2μl的10％NP-40。可用Triton X-100替代NP-40。 ⑧ 加入2μl的PNGase F. ⑨ 在37°C孵育1-3h。 注意：糖蛋白的去糖基化可以通过SDS-PAGE上的凝胶移位来观察，去糖基化的产物比糖基化的底物移动的更快。 2. 在非变性条件下进行质谱检测的蛋白质去糖基化 ① 在50mM碳酸氢铵（pH 7.8）中加入20μg的糖蛋白至终体积为18μl。 ② 加入2μl的PNGase F. ③ 在37°C孵育2-18h。 注意：在变性条件下大多数底物能够更好的去糖基化，在非变性条件下可能需要增加PNGase F的量和延长孵育时间。