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| 产地 | 中国 |
| 品牌 | Chemstan |
| 货号 | CS-D0012 |
| 用途范围 | 分析检测 |
| 纯度 | 99%% |
| CAS编号 | 76-59-5 |
| 规格 | 500mg |
| 是否进口 | 否 |
| 描述 | Bromothymol Blue 是一种 pH 指示剂，是测定弱酸弱碱时使用的一种指示剂，其酸性时为黄色，碱性时为蓝色。 |
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| 相关类别 | 信号通路 >> 其他 >> 其他 染料试剂 研究领域 >> 其他 |
| 体外研究 | 通过使用溴百里酚蓝（BTB）作为指示剂和磷酸钾作为缓冲剂，基于pH指示系统开发简单且直接的测量方法来进行*次表征和比较。基于BTB作为pH指示剂和磷酸钾作为缓冲组分开发了pH变换分析[1]。测试三种pH指示剂直接测定板上2- 2-酮-L-古洛糖酸（2-KLG）的产生。结果表明，Bromothymol Blue在明显的颜色变化和合适的pH范围（pH值为6.5-7.5时为蓝色至黄色）方面优于其他两个指标。在向琼脂平板中加入溴百里酚蓝溶液（0.1％，w / v）后，K. vulgare 07突变体菌落周围的区域从蓝色变为黄色，因为K. vulgare 07突变体在琼脂平板上释放2-KLG。从而酸化了殖民地周围的区域[2]。 |
| 激酶实验 | 对于所有三种酶，进行96深孔中的表达。因此，用相应的质粒转化电感受态大肠杆菌ArcticExpress（DE3）细胞。使用CP7200 Colony Picker挑选单个克隆，并通过MicroFlo Select分配器转移到装有1.2 mL自诱导培养基的96孔板中。孵育（36小时，37℃，1,000rpm）后，手动进行进一步处理。首先，将100μL细胞培养物转移到96孔板（U形底部）中并通过离心（4,570rpm，在室温下10分钟）收获，同时弃去上清液。将冷冻的颗粒（在-20℃下1小时）在室温下解冻1小时以改善细胞裂解。通过添加含有2mM KPi，pH 7.0,2mM MgCl2,10μg/ mL DNaseI，100μg/ mL溶菌酶的30μL裂解缓冲液（3小时，1,000rpm，37℃）继续裂解。接下来，添加120μL缓冲液（2mM KPi，pH 7.0），然后离心（3,000rpm，室温下15分钟）。对于光度测量，将20μL粗提取物转移至96孔板（F形底部），通过添加180μL主混合物开始反应，使最终体积为200μL（2.5mM KPi，pH 7.0,2mM MgCl2,25μg/ mL BTB和5mM酮 - 脱氧-D-葡糖二酸盐）。测量以2分钟的间隔进行60分钟。根据酶的不同，时间窗用于活动计算[1]。 |
| 参考文献 | [1]. Pick A, et al. Identification and characterization of two new 5-keto-4-deoxy-D-Glucarate Dehydratases/Decarboxylases. BMC Biotechnol. 2016 Nov 17;16(1):80. [2]. Yang W, et al. A plate method for rapid screening of Ketogulonicigenium vulgare mutants for enhanced 2-keto-l-gulonic acid production. Braz J Microbiol. 2017 Jul - Sep;48(3):397-402. |
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