1. 多次旋转离心柱，使沉降的凝胶悬浮并去除气泡。
   
2. 摘下尖端部分盖子，然后将色谱柱放入微量离心管（2 mL）中。取下上端盖子，使多余的填料缓冲液在重力作用下排出，直至到达管内凝胶顶部。如果色谱柱没有开始流动，则将盖子推回色谱柱，然后再次将其取下以开始流动。去掉耗尽的缓冲液，然后将色谱柱放回试管中。
   
3. 在1,000 xg的旋转桶式离心机中离心1分钟，以除去缓冲液。
   
4. 将1 mL平衡缓冲液加到色谱柱上。通过重力使缓冲液流失或将色谱柱离心1分钟以除去缓冲液。从收集管中丢弃缓冲液。重复此过程3-4次。
   
5. 在1,000 xg的旋转桶式离心机中离心2分钟，以除去反应缓冲液。
   
6. 将色谱柱放在干净的2.0 ml微量离心管或12 x 75 mm试管中。小心地将样品（20–100 μl）加入色谱柱的顶部中心。可能需要仔细调整样品量以达到最佳性能。
   
7. 上样后，以1,000 x g离心色谱柱5分钟。
   
8. 离心后，纯化的样品现在位于平衡缓冲液中，并且将保留小于色谱柱排除极限（?6000）的分子于色谱柱中。
   
9. 收集洗脱液，并正确处理用过的色谱柱。注意：旋转柱可放入2 mL微量离心管或12 x 75 mm试管中，以在离心过程中收集样品。使用色谱柱随附的2 mL微管进行初始色谱柱平衡步骤。注意：摆动桶式离心机能够产生至少1,000 xg的力，适用于Bio-Spin色谱柱。在特定转速下产生的重力是微量离心机转子半径的函数。有关从每分钟转数（RPM）转换为离心力的信息，请参阅离心机说明书。或者，使用以下所示的公式来计算达到1000 x g引力所需的RPM速度。

CF（g）=（1.12 X 10 ^-5）X（RPM）² X r                 

RCF =相对离心力，
RPM =转子速度
r =从转子中心到Bio-Spin色谱柱中间的半径（cm）

图示