Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的钙离子检测试剂盒 ，钙对所有生物体都是必不可少的，特别是在细胞生理学中，钙离子Ca²⁺进出细胞质的运动是许多细胞过程的信号。钙是人体中质量第五丰富的元素，它是一种具有许多功能的常见细胞离子信使，也可作为骨骼中的结构元素。钙在调节血管收缩和舒张，神经冲动传递，肌肉收缩和激素分泌中起重要作用。钙的血清水平在人体内的相当有限的范围（9至10.5mg / dL）内受到严密调节。低钙血症和高钙血症都是严重的医学疾病。低钙水平的原因包括慢性肾功能衰竭，维生素D缺乏和严重酒精中毒可能发生的低血镁水平。使用我们专有的红色荧光探针的Amplite 钙检测试剂盒提供了一种在生理解决方案中检测钙的简单方法。荧光酶标仪可以轻松读取荧光信号。 Amplite 钙检测试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于自动调整，无需分离步骤。该测定可在30分钟内完成。使用Amplite 钙检测试剂盒，我们检测到的钙含量仅为0.03 mM。

样品实验方案

简要概述

1.准备测定反应混合物（50μL）
2.添加钙标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育5-30分钟
4.监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1Rhod Red 原液（200X）：
将50μL无菌H2O加入Rhod Red 指示剂（组分A）的小瓶中。

2.标准溶液配制

钙标准溶液配制
通过将适量的300mM钙标准品（组分C）稀释到H 2 O中来制备钙标准品，以产生0至3mM的钙浓度。

3.工作溶液配制

将25μLRhodRed 储备溶液（200X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.025mL。避光。

操作步骤

表1.实心黑色96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。

CS =钙标准品（CS7-CS1,0.003至3mM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1.根据表1和2中提供的布局制备钙标准品（CS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL工作溶液，使总钙测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应5至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 540 / 590nm的荧光板读数器监测荧光强度。

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 

图1.使用Amplite 荧光钙定量试剂盒在固体黑色96孔板上测量钙剂量反应。

参考文献

High efficiency single-step biomaterial-based microparticle fabrication via template-directed supramolecular coordination chemistry
Authors: Kwok Kei Lai, Reinhard Renneberg, Wing Cheung Mak
Journal: Green Chemistry (2016): 1715--1723

Microcystin-LR causes sexual hormone disturbance in male rat by targeting gonadotropin-releasing hormone neurons
Authors: Xueting Wang, Jie Ding, Zou Xiang, Peipei Jiang, Jing Du, Xiaodong Han
Journal: Toxicon (2016): 45--55