脂质过氧化是细胞脂质被活性氧（ROS）氧化降解的过程。 该过程不仅可以导致细胞膜完整性的破坏，而且可以使膜结合受体失活。 它是自由基介导的细胞损伤的主要原因之一。 Cell Meter 荧光细胞脂质过氧化测定试剂盒提供了一种检测脂质过氧化的灵敏方法。该试剂盒使用我们敏感的比例脂质过氧化指示剂Lipoxite R590 / G520，当细胞中的ROS被过氧化时，它的红色荧光从红色变为绿色，这种依赖于过氧化的转变使得可以进行脂质过氧化的比例测量。我们的试剂盒包括过氧化氢，作为诱导脂质过氧化的阳性对照治疗方法。

样品实验方案

简要概述

1. 处理平板细胞。
2. 用目标化合物处理孵育细胞。
3. 添加Lipoxite R590 / G525。
4. 除去介质，并用PBS洗涤。
5. 通过FITC / TRITC或FITC / PE通道通过荧光显微镜或流式细胞仪分析样品。

溶液配制 

工作溶液配制

通过将500X Lipoxite R590 / G525（组分A）以1:50稀释到HHBS（组分B）中，制备Lipoxite R590 / G525的10X工作溶液。

实验步骤

1.以所需的密度培养细胞，并在37°C含5％CO₂的潮湿箱中孵育过夜。

2.根据需要用测试化合物处理细胞。 注意：对于阳性对照，以约250 μM（1X）的终浓度向细胞中添加过氧化氢（组分C）30分钟。

3.向细胞中添加10X Lipoxite R590 / G525，终浓度为1X（例如，向90uL细胞中添加10uL）。

4.将细胞在5％CO₂细胞培养箱中于37°C孵育30分钟。

5.除去培养基，并用HHBS（组分B）或DPBS洗涤细胞三遍。

6.在染色后2小时内，使用荧光显微镜或流式细胞仪通过FITC/TRITC或FITC/PE通道检测细胞的荧光。

图示

图1. HeLa细胞在37°C的完全生长培养基中用1X Lipoxite R590 / G525染色30分钟。 对于H2O2处理，将约250 μM H2O2添加到细胞中并孵育30分钟。 然后将细胞与1X Lipoxite R590 / G525孵育，并在孵育的最后10分钟内用Hoechst 33342染色。 用HHBS洗涤细胞3次，并用Keyence荧光显微镜成像。 用H2O2处理，观察到红色到绿色的荧光信号明显转移。

图2. Jurkat细胞在37°C的完全生长培养基中用1X Lipoxite R590 / G525染色30分钟。 对于H2O2处理，将约250 μM H2O2添加到细胞中并孵育30分钟。 然后将细胞与1X Lipoxite R590 / G525孵育，并用流式细胞仪通过FITC（488/530 nm）和PE（488/572 nm）通道进行分析。 数据表示为红色（PE）/绿色（FITC）荧光强度的比率。 在H2O2处理的细胞中，红色/绿色的比率降低，表明存在H2O2诱导的脂质过氧化。