我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位的丧失来监测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联反应中的其他下游事件。我们的Cell Meter NIR线粒体膜电位检测试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方法，可检测线粒体膜电位丧失的细胞凋亡。该荧光测定法是基于我们专有的阳离子MitoLite NIR 染料对细胞中线粒体膜电位的检测。在正常细胞中，MitoLite NIR 主要在线粒体中积累，但是在凋亡细胞中，MitoLite NIR 染色强度降低。用MitoLite NIR 染色的细胞可以在620-640 nm激发下在660-680 nm荧光下进行检测。该试剂盒可用于筛选凋亡激活剂和抑制剂。该测定可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行。

样品实验方案

简要概述

1. 准备细胞
2. 添加测试化合物
3. 添加MitoLite NIR工作溶液（100 μL /孔/ 96孔板或25 μL /孔/ 384孔板）
4. 在5％CO₂的培养箱中于37°C孵育30-60分钟
5. 添加测定缓冲液B（50 μL /孔/ 96孔板或12.5 μL /孔/ 384孔板）
6. 检测Ex / Em = 640/680 nm（截止= 665 nm）的荧光强度（底部读取模式）

溶液配制

工作溶液配制

将50 μL的200X MitoLite NIR（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液A（组分B）中，并充分混合以制成MitoLite NIR工作溶液，避光。

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间，以诱导细胞凋亡并建立平行对照实验。

阴性对照：仅用载体处理细胞。

阳性对照：在37℃，5％CO₂培养箱中，以5-50 μM的浓度用FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。 注意：CCCP或FCCP可以与MitoLite NIR同时添加。 为了获得最佳结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

2.在添加MitoLite NIR工作溶液之前，请去除细胞培养基。注意：在添加MitoLite NIR工作溶液之前，必须除去细胞培养基。

3.将100 μL /孔/ 96孔板或25 μL /孔/ 384孔板的MitoLite NIR工作溶液添加到细胞板中。

4.在37°C，5％CO₂的培养箱中避光放置30-60分钟。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.在检测荧光信号之前，将50 μL /孔/ 96孔板或12.5 μL /孔/ 384孔板的测定缓冲液B（组分C）加入细胞板。注意：加载后请勿洗涤细胞。对于非贴壁细胞，建议在加入测定缓冲液B（组分C）后，以800 rpm离心细胞板2分钟，然后制动。

6.加入测定缓冲液B（组分）10到30分钟后，使用荧光酶标仪（底部读取模式）（Ex / Em = 640/680 nm（Cutoff = 665 nm））检测荧光强度。

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