适用仪器

简要概述

1. 在96孔板中制备细胞（100 μL /孔）
2. 每空加入10ul WST-8^TM溶液
3. 在37°C孵育1-4小时
4. 监测OD = 460 nm处的吸光度

如果将WST-8^TM溶液保存在4°C并避光，其稳定性可超过一年。 将其存放在<-20°C的温度下以便更长的存储时间。

操作步骤

细胞增殖和细胞毒性检测

1. 在具有透明底部的组织培养微孔板中培养细胞（5000到10,000个细胞/孔板）。
2. 将测试化合物添加到细胞中，并在37°C，5％CO₂的培养箱中孵育，所需的时间根据具体实验而定（例如24、48或96小时）。 对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相同量的测试化合物。 对于96孔板，建议的总体积为100 μL，对于384孔板，建议的总体积为50 μL。 注意：应单独评估每种细胞系，以确定增殖或细胞毒性诱导的最佳细胞密度。 对于增殖测定，使用较少的细胞； 对于细胞毒性测定，请使用更多的细胞。
3. 向每个孔中加入10 μL /孔（96孔板）或5 μL /孔（384孔板）的WST-8^TM溶液。
4. 将板在37°C下孵育1-4小时，避光。 注意：孵育时间可能从30分钟到过夜，具体取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
5. 用吸光度板酶标仪在OD = 460 nm处监测吸光度的增加。

细胞计数检测

1. 在具有透明底部的组织培养微孔板中准备细胞培养物。 对于96孔板，建议的总体积为100 μL；对于384孔板，建议的总体积为50 μL。 注意：我们在透明的底部96孔板中使用了连续稀释的HeLa和Jurkat细胞悬浮液进行测定。
2. 向每个孔中加入10 μL /孔（96孔板）或5 μL /孔（384孔板）的WST-8^TM溶液。
3. 将板在37°C下孵育1-4小时，避光。 注意：孵育时间可能从30分钟到过夜，具体取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
4. 使用吸光度板读数器在OD = 460 nm处监测吸光度的增加。

数据分析

从空白标准孔获得的读数（Abs（460 nm））用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值即可得到基线校正值。 然后，绘制标准读数，以获得标准曲线和方程式。 该方程式可用于计算细胞数/孔样品。 我们建议您使用在线线性回归计算器，

参考文献

miR-218 inhibits the proliferation of human glioma cells through downregulation of Yin Yang 1
Authors: Yong Gao, Laisheng Sun, Zicheng Wu, Chengmin Xuan, Junxia Zhang, Yongping You, Xincheng Chen
Journal: Molecular Medicine Reports (2017)