Thiolite  Green硫醇化合物绿色荧光探针是美国AAT Bioquest生产的荧光探针 ，Thiolite Green是用于测量硫醇化合物的最灵敏的荧光探针之一。与硫醇化合物（例如半胱氨酸）反应时，会生成绿色荧光加合物。它可用于定量蛋白质上的半胱氨酸数量。我们用它来荧光测量谷胱甘肽。与含硫醇的化合物反应后，其荧光增强> 200倍。

操作步骤

1.准备Thiolite Green 工作溶液：

1.1在高品质无水DMSO中准备10至25 mM的Thiolite Green 储备溶液。储备溶液应及时使用；任何剩余的溶液均需等分并冷冻在-20℃。

注意：未使用的Thiolite Green储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在-20^oC下避光保存。

1.2准备一个2X Thiolite 绿色 工作溶液：在实验的当天，要么溶解Thiolite 绿色 在DMSO或解冻的等分试样Thiolite 绿色 原液至室温。在pH值为20的20 mM Hepes缓冲液或您选择的缓冲液中，制备终浓度为100至250 μM的2X工作溶液，建议使用终浓度为50至100 μM的Thiolite Green 来测量硫醇溶液浓度。

2.在上清液中进行GSH分析：

2.1向GSH 标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 μL 2X Thiolite Green 工作溶液（来自步骤1.2），使GSH 测定总体积为100 μL /孔。

注意：对于384孔板，将25 μL样品和25 μL GSH反应混合物加到每个孔中。

2.2在避光的条件下，将反应在室温下孵育10至60分钟。

2.3用荧光板读数器在Ex / Em = 490/525 nm处监测荧光的增加。

2.4使用空白孔（仅使用测定缓冲液）中的荧光作为对照，并通过硫醇反应从这些孔的值中减去。

参考文献

Gas Chromatography/Mass Spectrometry-Based Metabolomic Profiling Reveals Alterations in Mouse Plasma and Liver in Response to Fava Beans
Authors: Man Xiao, Guankui Du, Guobing Zhong, Dongjing Yan, Huazong Zeng, Wangwei Cai
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Virus-like particles with removable cyclodextrins enable glutathione-triggered drug release in cells
Authors: Kenichi Niikura, Naotoshi Sugimura, Yusuke Musashi, Shintaro Mikuni, Yasutaka Matsuo, Shintaro Kobayashi, Keita Nagakawa, Shuko Takahara, Chie Takeuchi, Hirofumi Sawa
Journal: Molecular biosystems (2013): 501--507