锌离子荧光探针Zinquin AM是美国AAT Bioquest生产的用于锌离子检测的荧光探针 ，Zinquin AM酯是一种亲脂的，锌敏感的，可透过细胞的荧光探针。它被保留在活细胞中，因为AM酯被细胞溶质酯酶切割，产生携带负电荷的Zinquin，防止其流过质膜。Zinquin荧光探针可以通过在含有5-40μMZinquin乙酯的PBS中与钙和镁（或在培养基中）的培养基中加载到细胞中。通常将细胞与Zinquin乙酯在37℃下孵育15-30分钟。确切的加载浓度，时间和温度取决于实验目的和细胞类型，因此需要通过实验优化。用PBS在培养基中洗涤细胞以除去细胞外剩余的染料。在显微镜下观察细胞或用于共聚焦显微镜，FACS或荧光分光光度法分析。锌是体内第二丰富的过渡金属，它作为催化，结构和调节离子必不可少。锌离子参与体内平衡，免疫反应，氧化应激，细胞凋亡和衰老。已经提出锌作为突触前神经元的常规神经递质和跨越突触后神经元的跨膜信号起作用。异常的锌代谢与许多神经系统疾病有关，包括阿尔茨海默病，帕金森病和癫痫。已证明最适合体内监测锌的技术是荧光成像。免疫反应，氧化应激，细胞凋亡和衰老。已经提出锌作为突触前神经元的常规神经递质和跨越突触后神经元的跨膜信号起作用。异常的锌代谢与许多神经系统疾病有关，包括阿尔茨海默病，帕金森病和癫痫。已证明最适合体内监测锌的技术是荧光成像。免疫反应，氧化应激，细胞凋亡和衰老。已经提出锌作为突触前神经元的常规神经递质和跨越突触后神经元的跨膜信号起作用。异常的锌代谢与许多神经系统疾病有关，包括阿尔茨海默病，帕金森病和癫痫。已证明最适合体内监测锌的技术是荧光成像。

操作步骤

1.准备HHBS缓冲液
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Zinquin AM * UltraPure级*原液。
2.1使用的Zinquin AM * UltraPure等级*的量：1毫克
2.2所需浓度：2 mM
2.3在合适的容器中，将1mg Zinquin AM * UltraPure级*与1090.56μL无水DMSO混合。
 

3.使用10μMZinquinAM * UltraPure等级* 2在HHBS中制备2X工作溶液
3.1Zinquin AM * UltraPure等级的最终井内浓度*：5μM
3.2在合适的容器中混合16μL的Zinquin AM * UltraPure等级*。然后，添加HHBS或您选择的缓冲液，直到体积为3.2毫升。
注意：对于大多数细胞系，我们建议Zinquin AM * UltraPure等级的最终浓度为4至5μM。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X，并将每种组分的最终浓度调节至以下：5μMZinquinAM * UltraPure等级*
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育30-60分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.准备HHBS缓冲液（或您选择的缓冲液）。
6.1在合适的容器中加入HHBS或您选择的缓冲液，直至体积为4 mL。
 

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液，使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先，从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS（或您选择的缓冲液）。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 360/480 nm运行实验。

参考文献

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