Amplite 比色法丙三醇检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙三醇 的试剂盒，甘油是肝脏和脂肪组织中合成甘油三酯和磷脂的前体。 禁食时，储存在这些脂滴中的甘油三酯可被水解以产生游离甘油和脂肪酸。 释放到血流中的游离甘油的量与甘油三酯/脂肪酸循环速率成正比，甘油三酯/脂肪酸循环速率在代谢调节和热量产生中是重要的。 Amplite 比色甘油测定试剂盒为测量生物样品中的甘油水平提供了一种灵敏的测定方法。 该测定基于甘油的酶偶联反应，其中在HRP偶联反应中使用我们的Amplite Red HRP底物可以检测产物过氧化氢。 信号可以使用OD575nm的吸光度酶标仪进行测量。 使用这种比色甘油测定试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至0.15μg/ mL（?1.6μM）的甘油。

样品实验方案

简要概述

1.准备甘油工作溶液（50 μL）
2.加入甘油标准品或测试样品（50 μL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm的OD

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite HRP底物储备液（200X）：
将50 μL DMSO（组分E）添加到Amplite HRP底物（组分A）的小瓶中，制成200X储备溶液。

1.2 甘油标准溶液：
将1 mL ddH2O或1X PBS缓冲液添加到小瓶甘油标准品（组分D）中，制成1 mg / mL甘油标准液。

2.标准溶液

甘油标准
将10 μL甘油标准储备溶液（1 mg / mL）加入990 μL 1X PBS缓冲液中，以生成10 μg / mL标准溶液（G7）。 然后进行1：2的系列稀释，以获得系列稀释的甘油标准品（G6-G1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一瓶酶混合物（组分B）中，并充分混合。

3.2 将25 μL Amplite HRP底物原液添加到组分B + C的瓶子中，并充分混合以制成甘油工作溶液（组分A + B + C）。 注意：此甘油工作溶液足以用于一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。 注意：可以将未使用的B + C组分分成一次性使用的等分试样，并保存在-20°C下。

样品操作及实验分析

表1.透明底部96孔微孔板中甘油标准品和测试样品的布局。 G =甘油标准品（G1-G7，0.156至10 μg / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备甘油标准品（G），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 μL试剂代替50 μL。

2.在甘油标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 μL甘油工作溶液，以使总甘油测定体积为100 μL /孔。 对于384孔板，应在每个孔中添加25 μL甘油工作溶液，总体积为50 μL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至1小时。

4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加，并在575 nm的OD处进行路径检查。

参考文献

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