铅是一种对人类，特别是对儿童有剧毒的金属。铅干扰细胞信号和基因表达，对大脑、肝脏、会造成严重损害，甚至会导致死亡。由于其在采矿和冶炼中的悠久历史，以及在电池、油漆和汽油中的广泛应用，土壤和地下水中的铅污染一直是最严重的环境问题之一。Amplite 荧光法铅离子定量试剂盒为检测溶液中的铅离子提供了一种稳定的方法。它使用Lead Green，一种高选择性和高灵敏的绿色荧光探针，可以用荧光酶标仪（Ex/Em=490/530nm）轻松检测。Amplite 荧光法铅离子定量试剂盒可在方便的96孔或384孔微孔板中进行实验操作，且易于自动化，无需分离步骤。分析可在30分钟内完成。用Amplite 荧光法铅离子定量试剂盒，仅检测到4μM铅离子。

铅离子检测样品分析方案

概述

1. 准备并添加铅标准品或测试样品（50 μL）
2. 准备并添加Lead Green工作溶液（50 μL）
3. 在室温下孵育10-30分钟
4. 检测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

Lead Green储备溶液（200X）：将50 μL DMSO（组分D）添加到Lead Green（组分A）的小瓶中，制成Lead Green储备溶液（200X）。 注意：将未使用的Lead Green储备溶液分装在-20°C下。

标准溶液配制

将10 μL 100mM Lead标准溶液（组分C）添加到990μL H₂O中以生成1mM铅标准溶液。 取1mM铅标准溶液（LS7）以H₂O进行1：3连续稀释，以得到1.34至1000 μM（LS1至LS7）的系列稀释铅标准溶液。

工作溶液配制

Lead Green工作溶液：将25 μLLead Green储备溶液（200X）加入5 mL的测定缓冲液（组分B），使总体积为5.025 mL。 注意：避光，请立即使用Lead Green工作溶液，不可长时间放置。

操作步骤

表1.黑色96孔板中铅标准品和测试样品的布局。 LS =铅标准品（LS1-LS7，1.34至1000 μM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成。

1. 根据表1和2中提供的信息，准备铅标准品（LS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 μL试剂代替50 μL。
2. 在铅标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 μL Lead Green工作溶液，以使铅总测定体积为100 μL /孔。 对于384孔板，将25 μL工作溶液添加到每个孔中，而不是总体积为50 μL /孔。
3. 在避光条件下，室温下孵育反应10至30分钟。
4. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/530 nm处检测荧光强度。

数据分析

从空白标准井获得的读数（RFU）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，得到基线校正值。然后，绘制标准读数，得到标准曲线和方程。该方程可用于计算Pb2+样品。我们建议使用在线四参数物流计算器

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