Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测甘油的试剂盒 ，甘油3-磷酸（G3P）是糖酵解代谢途径中的重要中间体。动物，真菌和植物使用G3P产生ATP。 它用于再生脑和骨骼肌细胞中的NAD +。 G3P与肥胖等脂质失衡疾病有关。 Amplite G3P分析试剂盒提供了量化G3P最灵敏的方法之一。 该试剂盒使用Amplite Red底物来量化G3P的浓度，其与酶偶联反应循环中形成的过氧化氢的浓度成比例。 该试剂盒是与HTS应用兼容的优化“混合和读取”格式。 如图1所示，它可在100μL检测体积内检测到12.5μMG3P。检测方法可以使用方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。 使用吸光度酶标仪可以在?576 +/- 5 nm处轻松读取信号。

样品实验方案

简要概述

1.制备3-磷酸甘油工作溶液（50 μL）
2.加入3-磷酸甘油标准液或测试样品（50 μL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm OD处的吸光度增加

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液（200X）：
将50 μL DMSO（组分E）添加到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中，制成200X储备液。 避免暴露在光线下。

1.2 G3P标准溶液（10 mM）：
将250 μL ddH₂O加到G3P标准品（组分D）的小瓶中，制成10 mM G3P标准品溶液。

2.标准溶液配制

G3P标准
将100 μL 10 mM G3P标准储备液添加到900 μL 1X PBS缓冲液中，以生成1000 μM G3P标准溶液。 将200 μL的1000 μM G3P标准溶液加入800 μL的1X PBS缓冲液中，以生成200 μM的G3P标准溶液（CS7），然后进行1：2的系列稀释，以得到其余的G3P标准液（CS6-CS1）。 注意：稀释的G3P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液配制

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到瓶酶混合液（组分B）中，并充分混合。

3.2 将25 μL Amplite Red底物储备液（200X）加入同一瓶酶混合液（组分B）中，制成G3P工作溶液（最终瓶应包含组分A，B和C）。 注意：应立即使用G3P工作溶液，并远离光线。

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板中的G3P标准品和测试样品的布局。 CS = G3P标准（CS1-CS7，6.25至200 μM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将G3P标准品（CS），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔透明底部/黑色壁微孔板中。对于384孔板，请使用 每孔25 μL试剂，而不是50 μL。 注意：根据需要处理细胞或组织。

2.在G3P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 μL G3P工作溶液，以使G3P测定总体积为100 μL /孔。 对于384孔板，将25 μL G3P工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 μL /孔。

3.在避光的条件下，将反应在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm（或570 nm / 610 nm的比率）处监控吸光度的增加。

参考文献

CCAAT/enhancer binding protein-beta negatively regulates the expression of glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1 in pig PK-15 cells
Authors: Gao Y, Pan Y.
Journal: J Appl Genet (2011): 451

Interaction of fosfomycin with the glycerol 3-phosphate transporter of Escherichia coli
Authors: Santoro A, Cappello AR, Madeo M, Martello E, Iacopetta D, Dolce V.
Journal: Biochim Biophys Acta (2011): 1323

Rickettsia prowazekii uses an sn-glycerol-3-phosphate dehydrogenase and a novel dihydroxyacetone phosphate transport system to supply triose phosphate for phospholipid biosynthesis
Authors: Frohlich KM, Roberts RA, Housley NA, Audia JP.
Journal: J Bacteriol (2010): 4281

Design and synthesis of small molecule glycerol 3-phosphate acyltransferase inhibitors
Authors: Wydysh EA, Medghalchi SM, Vadlamudi A, Townsend CA.
Journal: J Med Chem (2009): 3317

Effects of salinity changes on the growth of Dunaliella salina and its isozyme activities of glycerol-3-phosphate dehydrogenase
Authors: Chen H, Jiang JG, Wu GH.
Journal: J Agric Food Chem (2009): 6178

The presence of distal and proximal promoters for rat mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase
Authors: Aneja KK, Guha P, Shilpi RY, Chakraborty S, Schramm LM, Haldar D.
Journal: Arch Biochem Biophys (2008): 35

Aging and acyl-CoA binding protein alter mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase activity
Authors: Kannan L, Knudsen J, Jolly CA.
Journal: Biochim Biophys Acta (2003): 12

CTP:glycerol 3-phosphate cytidylyltransferase (TarD) from Staphylococcus aureus catalyzes the cytidylyl transfer via an ordered Bi-Bi reaction mechanism with micromolar K(m) values
Authors: Badurina DS, Zolli-Juran M, Brown ED.
Journal: Biochim Biophys Acta (2003): 196

Stimulation of rat liver mitochondrial sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase by polymyxin B via enhanced extraction of lysophosphatidic acid
Authors: Roy A, Guha N, Veras ID, Chakraborty S, Haldar D.
Journal: Lipids (2003): 965

Purification and characterization of cytosolic glycerol-3-phosphate dehydrogenase from skeletal muscle of jerboa (Jaculus orientalis)
Authors: Berrada W, Naya A, Iddar A, Bourhim N.
Journal: Mol Cell Biochem (2002): 117