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Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 红色荧光
物品单位 价格 品牌
3924 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 kit
  • 货号:CS13511
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-23
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS13511
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 kit
是否进口
简要概述

Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测MMP 的试剂盒,基质金属蛋白酶(MMP)构成锌依赖性内肽酶家族,其在细胞外基质内起作用。 这些酶负责结缔组织的分解,并且在骨重塑,月经周期和组织损伤的修复中是重要的。虽然很难评估MMP对某些病理过程的确切贡献,但MMP似乎在关节炎的发展以及癌症的侵袭和转移中起关键作用。

我们的Amplite 通用荧光MMP活性测定试剂盒使用Tide Fluor 2(TF2)/ Tide Quencher 2(TQ2)荧光共振能量转移(FRET)肽作为通用MMP活性指示剂。 它旨在检查MMP酶的一般活性并筛选MMP抑制剂。 在完整的FRET肽中,TF2的荧光被TQ2猝灭。 在通过MMP切割成两个单独的片段后,回收TF2的荧光。 TF2探针具有优异的荧光量子产率和更长的波长,比EDANS / Dabcyl FRET底物灵敏得多。 其信号可通过荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525 nm处轻松读取。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 540nm
发射 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

96孔板测定示例

概述

添加适当的对照或测试样品(50μL)

预孵育10-15分钟

添加MMP Green 底物溶液(50μL)

孵育0分钟(用于动力学读数)或30分钟至1小时(终点读数)

在Ex / Em = 490/525 nm处监测荧光强度

注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.根据需要制备含有生物样品的MMP。

 

2.激活pro-MMPs:

2.1制备2mM APMA工作溶液(2X):用1:500稀释1M APMA(组分B)和测定缓冲液(组分C),得到2mM APMA工作溶液(2X)。

注意:APMA属于有机汞。 小心轻放! 根据当地法规处理。

2.2用APMA包埋MMPs:用等体积的2mM APMA工作溶液(2X,来自步骤2.1)孵育含有MMP的样品或纯化的MMPs。 有关孵育时间,请参阅说明书中的附录I. 在实验之前立即激活MMP。

注意1:将含酶样品保存在冰上。 避免剧烈涡旋酶。长时间储存活化酶会使酶失活。

注意2:对于酶活化,优选在较高蛋白质浓度下活化。激活后,您可以进一步稀释酶。

 

3.准备工作解决方案:

3.1制备MMP Green 底物工作溶液:用1:100稀释MMP Green 底物(组分A)和测定缓冲液(组分C),如说明书中表1所示。

3.2制备MMP稀释:如果使用纯化的MMP,则在测定缓冲液(组分C)中将MMP稀释至合适的浓度。

注意:Pro-MMP需要在使用前激活(参见步骤2.2)。 避免剧烈涡旋酶。

3.3制备抑制剂和化合物稀释:如果您正在筛选MMPs抑制剂,请根据需要稀释已知的MMPs抑制剂和测试化合物。

 

4.根据说明书中的表2和表3在96孔微孔板中建立酶促反应:

 

5.运行酶反应:

5.1如果您正在筛选MMPs抑制剂,则将培养板在酶反应(例如25°C或37°C)的所需温度下预孵育10-15分钟。

5.2将50μL(96孔)或20μL(384孔)MMP Green 底物溶液(来自步骤3.1)加入到测定板的样品和对照孔中。充分混合试剂。

5.3用Ex / Em = 490 / 525nm的荧光板读数器监测荧光强度。

动态读数:立即开始测量荧光强度,每5分钟连续记录数据30至60分钟。

终点读数:在室温下孵育反应30至60分钟,如果可能,避免光照。 充分混合试剂,然后测量荧光强度。

 

参考文献

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