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5-FAM-YVAD-FMK
物品单位 价格 品牌
1272 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:25 Tests
  • 货号:CS13473
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-23
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS13473
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 25 Tests
是否进口
简要概述

5-FAM-YVAD-FMK是美国AAT Bioquest生产的用于Caspase 的试剂,FAM-YVAD-FMK,即5-羧基荧光素-Tyr-Val-Ala-Asp-氟甲基酮,在刺激的细胞中不可逆地结合到活性胱天蛋白酶1。 FAM-YVAD-FMK信号的荧光强度与活性半胱天冬酶1的量成正比,可以通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪轻松检测。



产品说明书

样品操作及分析

以下说明书仅提供指导,实际实验请根据您的特定需求进行修改。

使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常规胱天蛋白酶测定方案

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.准备2X半胱天冬酶底物(50 μM)分析溶液:50 μL底物原液,100 μL DTT(1M),400 μL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合,并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪检测荧光或使用酶标仪检测吸光度。

 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液(HHBS)在Hanks中稀释DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X渗透性半胱天冬酶底物(20 μM)分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合(来自步骤2.3),并在37°C,5%CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪检测荧光强度。

 

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定(仅适用于#13470-13476)

1.通过向小瓶中加入50 μL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1:250的比例将250X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中(例如2 μL至500 μL细胞),并将细胞在37°C,5%CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪检测荧光强度。

 

参考文献

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Authors: A. Kon
Journal: Oncol Rep (2013): 1965-70

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Journal: J Cell Physiol (2006): 457-67

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Authors: W. S. Yang
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Selective caspase activation may contribute to neurological dysfunction after experimental spinal cord trauma
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