蛋白酶体20S荧光底物(Suc-LLVY)2R110是美国AAT Bioquest生产的荧光底物 蛋白酶体的主要功能是通过蛋白水解（一种破坏肽键的化学反应）降解不需要的或受损的蛋白质。 蛋白酶体降解途径对于许多细胞过程是必不可少的，包括细胞周期，基因表达的调节和对氧化应激的反应。 该途径中最常见的蛋白酶体形式是蛋白酶体26S，一种ATP依赖性蛋白水解复合物，其含有一个20S（700-kDa）核心颗粒结构和两个19S（700-kDa）调节帽。 20S核心包含三种主要的蛋白水解活性，包括胰凝乳蛋白酶样，胰蛋白酶样和半胱天冬酶样活性。 它负责细胞凋亡，DNA修复，内吞作用和细胞周期控制所涉及的关键蛋白的分解。

AAT Bioquest提供一组R110底物，用于监测蛋白酶体在不同亚位点的蛋白酶活性，即（i）亚位点：1c，Z-LLE-R110; 2c，Ac-KQL-R110; 5c，Ac-WLA-R110; 1i，Ac-PAL-R110; 2i，Ac-KQL-R110; 5c，Ac-WLA-R110和Suc-LLVY-R110;和5i，Ac-ANW-R110。通过分别使用490nm和520nm的激发和发射波长监测R110随时间的释放来测量蛋白酶活性。我们还提供Suc-LLVY-AMC，非荧光基板产生亮蓝色荧光AMC产品，其Ex / Em = 351 / 430nm，并且可以使用DAPI滤光片组轻松检测。通常，R110底物比基于AMC-，AFC-或4-硝基苯胺的底物灵敏得多。

操作方法

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在DMSO中制备5至10 mM的储备溶液。

2.准备2X蛋白酶体底物（20至50μM）测定溶液，如下所示：

25至50 L底物储备液（10 mM）

100升DTT（1M）

400 L EDTA（100 mM）

10mL Hepes Buffer（25mM），pH = 7.4

3.用2X荧光蛋白酶体底物测定溶液（来自步骤1）混合等体积的质体标准物或样品，并在室温下孵育溶液至少1小时。

4.监测荧光使用荧光酶标仪。

参考文献

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