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酪朊酸,FITC标记
物品单位 价格 品牌
2604 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:5 mg
  • 货号:CS13440
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-23
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS13440
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 5 mg
是否进口
简要概述

酪朊酸,FITC标记是美国AAT Bioquest生产的荧光染料 ,酪蛋白被认为是通用的蛋白酶底物,经蛋白酶催化所得产物具有很宽的光谱范围。由于这种本身就具有荧光特征的酪蛋白可以被许多蛋白酶水解,因此它们广泛地用于荧光测定法检测蛋白酶活性的试验中。作为一个完整的底物,酪蛋白上带着5-FITC标签,具有显著的荧光淬灭效果。经过蛋白酶催化水解,释放其淬灭效果,产生明亮的绿色荧光染料所标记的短肽;这种荧光强度的增加与蛋白酶的活性成直接的比例关系。我们不推荐将这种偶联物用于荧光偏振分析。在荧光偏振分析中我们可以使用常规的荧光素标记的酪蛋白偶联物。



产品说明书

样品实验方案 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
酪蛋白,FITC共轭原液:
在PBS缓冲液中制成5-10 mg / mL酪蛋白,FITC偶联的原液。

 

2.工作溶液

酪蛋白FITC共轭工作溶液(2X):
将FITC偶联的原液以100-400μg/ mL的浓度稀释至50-100 mM Tris缓冲液(pH 7.4)中。 2X Assay工作溶液设计用于检测胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,嗜热菌蛋白酶,蛋白酶K,蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。 对于其他蛋白酶,请参考表1中合适的测定缓冲液配方。 对于每种蛋白酶,应通过实验确定测定工作溶液的最佳浓度。

 

样品操作及分析

1.将等体积的胰蛋白酶标准品或样品与2X Assay工作溶液混合。

2.在Ex / Em = 490/525 nm处监控荧光的增加。

2.1 对于动力学读数:立即开始连续连续测量荧光强度,并每5分钟记录一次数据,持续30分钟。

2.2 对于终点读数:在避光的条件下,将反应在所需温度下孵育30至60分钟。 然后测量荧光强度。

表1.测定工作溶液的适当测定缓冲液配方

蛋白酶 1x 分析缓冲液
组织蛋白酶D 20 mM柠檬酸钠,pH 3.0
木瓜蛋白酶 20 mM乙酸钠,20 mM半胱氨酸,2 mM EDTA,pH 6.5
PAE 20 mM磷酸钠,pH 8.0
胃蛋白酶 10 mM HCl,pH 2.0
猪胰弹性蛋白酶 10 mM Tris-HCl,pH 8.8
枯草杆菌 20 mM磷酸钾缓冲液,pH 7.6,150 mM NaCl

 

参考文献

Liquid temperature measurement method in microchannels by using fluorescence polarization
Authors: Kazuya Tatsumi, Chi Hsuan Hsu, Atsushi Suzuki, Kazuyoshi Nakabe
Journal: Heat and Mass Transfer (2017): 1--10

Micro-scale temperature measurement method using fluorescence polarization
Authors: K Tatsumi, CH Hsu, A Suzuki, K Nakabe
Journal: (2016): 032097

Microscopic Fluid Temperature Measurements Using Fluorescence Polarization Method
Authors: Kazuya Tatsumi, Akihisa Tozaki, Kazuyoshi Nakabe
Journal: (2011): T10167--T10167


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