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Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒 *10板*
物品单位 价格 品牌
12588 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 kit
  • 货号:CS36341
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS36341
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 kit
是否进口
简要概述

肿瘤细胞对细胞药物的耐药性被认为是化疗成功的主要障碍之一。有些肿瘤最初是耐药的,对细胞抑制药物治疗没有反应;另一些肿瘤最初反应良好,但最终会再生并产生耐药性。这种现象可能是由所给抗肿瘤药物诱导的基因突变引起的,也可能代表恶性肿瘤中已存在的耐药细胞群的选择。多药耐药(MDR)是多种化疗失败的主要因素。在过去的几年中,人们普遍认为化疗耐药性与至少两个ATP依赖的药物外排的过度表达有关。这些细胞膜蛋白,称为P-糖蛋白(Pgp,MDR1)和多药耐药相关蛋白(MRP1)是ABC转运体家族的成员。我们的检测试剂盒使用荧光MDR指示剂来检测这两种MDR活性。这种疏水性荧光染料分子迅速穿透细胞膜并保留在细胞内。短时间培养后,细胞内游离染料浓度明显增加。在表达MDR1和/或MRP1的细胞中,该染料被MDR转运体挤压,从而降低细胞荧光强度。然而,当其挤压被-干扰MDR1和MRP1活性的试剂阻断时,其细胞荧光强度明显增加。我们的MDR检测试剂盒提供了一个优化的检测方法的所有必须成分。该方法可在96孔或384孔微孔板中进行,且易于自动化。该试剂盒是高通量筛选MDR抑制剂或鉴定具有高水平MDR活性细胞的理想试剂盒。


适用仪器


荧光酶标仪
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色透明
读取模式: 底读模式


产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 添加MDR抑制剂或化合物
  3. 添加MDR染料加载溶液(对于96孔板为100 μL /孔,对于384孔板为25 μL /孔)
  4. 在室温下孵育1小时
  5. 使用底部读取模式检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度


溶液配制

储备溶液配制

MDR指示剂储备溶液:将20 μL(#CS36340-1板)或200 μL(#CS36341-10板)添加到MDR指示剂(组分A)中,并充分混合。 注意:20 μL MDR指示剂原液足以装满一块板。 未密封的MDR指示剂原液可以分装,并在<-20℃下保存1个月。 避光,并避免反复冻融。


工作溶液配制

MDR染料加载溶液:将20 μL的MDR指示剂储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液(组分C)中,并充分混合。 注意:MDR染料加载溶液足以装满一块板,并且在室温下至少可稳定2小时。


实验步骤

  1. 通过将10 μL的10X(96孔板)或5 μL的5X(384孔板)化合物加入化合物缓冲液(如PBS或HHBS)中来处理细胞。对于空白孔(没有细胞的培养基),添加相应量的化合物缓冲液。注意:添加化合物之前不必洗涤细胞。但是,如果测试的化合物对血清敏感,则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。抽吸后,向孔中添加相同体积的HHBS(例如,对于96孔板为90 μL,对于384孔板为20 μL)。或者,细胞可以在无血清培养基中生长。
  2. 在室温下或在37℃,5%CO2的培养箱中孵育细胞板至少15分钟。
  3. 加入100 μL /孔(96孔板)或25 μL /孔(384孔板)的MDR染料加载溶液。
  4. 在避光条件下,于室温下孵育染料加载板1小时。注意:适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。注意:上样后请勿洗涤细胞。注意:对于非贴壁细胞,建议在孵育后以800 rpm离心细胞板2分钟。
  5. 使用底部读取模式检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度。


图示

图1.环孢菌素A对MCF-7 / ADR细胞中P-gp的抑制作用。 环孢菌素A浓度的增加导致荧光信号的增加,这是由于P-gp的抑制所致,从而增强了MDR指示剂染料在细胞内的积累。 EC50 = 2.4μM(用试剂盒测量)。



参考文献

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