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Cell Meter APC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒
物品单位 价格 品牌
2604 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:100 Tests
  • 货号:CS22837
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS22837
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 100 Tests
是否进口
简要概述

Cell Meter APC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒 ,膜联蛋白V可以与包括APC的荧光染料缀合。保留了其对磷脂酰丝氨酸(PS)的高亲和力,因此可作为流式细胞仪分析细胞凋亡的灵敏探针。由于PS的外部化发生在凋亡的早期阶段,因此APC Annexin V染色比基于核变化(如DNA-片段化)的测定可更早地鉴定凋亡。 APC Annexin V染色是在膜完整性丧失之前,伴随着由凋亡或坏死过程导致的细胞死亡的最新阶段。因此,用APC Annexin V染色通常与诸如碘化丙锭(PI)或7-氨基放线菌素(7-AAD)等重要染料结合使用,以使研究者能够识别早期凋亡细胞。


适用仪器


流式细胞仪
激发: 640nm激光
发射: 660/20nm滤波片
通道: APC通道


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物(200μL/样品)制备细胞
2.加入APC-膜联蛋白V测定溶液
3.在室温下孵育20-60分钟
4.使用FL4通道的流式细胞仪分析细胞(Ex / Em = 635/660 nm)


储备溶液配制

除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. APC-Annexin V原液(100X):
将含有0.2%BSA的200μLPBS加入到APC-膜联蛋白V缀合物(组分A)的小瓶中并充分混合以制备100X APC-膜联蛋白V储备溶液。 注意:将重构的100X APC-Annexin V储备溶液储存在4 ℃。


操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。注意:膜粘附细胞的膜联蛋白V流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。然而,Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。


2.离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液(组分B)中。

4.向细胞中加入2μL100XAPC-膜联蛋白V原液。

5.可选:将2μL100X碘化丙啶(组分C)加入细胞中,用于坏死细胞。

6.在室温下孵育20至60分钟,避光。

7.可选:在使用流式细胞仪分析细胞之前,添加200至300μL的测定缓冲液(组分B)以增加体积。

8.使用具有FL4通道的流式细胞仪(Ex / Em = 635 / 660nm)监测APC-膜联蛋白V的荧光强度。当碘化丙啶加入细胞时,使用FL2通道测量细胞活力。


数据分析

在活的非凋亡细胞中,APC-膜联蛋白V检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡,其通常为所有细胞的2-6%。 在凋亡细胞中,APC-膜联蛋白V与磷脂酰丝氨酸结合,磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外叶上,因此导致染色强度增加。

图1.使用Cell Meter APC-膜联蛋白V结合细胞凋亡检测试剂盒检测Jurkat细胞中APC-膜联蛋白V与磷脂酰丝氨酸的结合活性。 将Jurkat细胞在37℃,5%CO2培养箱中在没有(蓝色)或1μM星形孢菌素(红色)的情况下处理约4小时,然后用APC-膜联蛋白V染色30分钟。 使用FL4通道,用FACSCalibur(Becton Dickinson)流式细胞仪测量APC-膜联蛋白V的荧光强度。


参考文献

ALDH1 Bio-activates Nifuroxazide to Eradicate ALDHHigh Melanoma-Initiating Cells
Authors: Sana Sarvi, Richard Crispin, Yuting Lu, Lifan Zeng, Thomas D Hurley, Douglas R Houston, Alex von Kriegsheim, Che-Hong Chen, Daria Mochly-Rosen, Marco Ranzani
Journal: Cell Chemical Biology (2018)

CHIP functions as an oncogene by promoting colorectal cancer metastasis via activation of MAPK and AKT signaling and suppression of E-cadherin
Authors: Jingjing Xu, Jun Zhou, Hanjue Dai, Fei Liu, Wenjing Li, Wenjuan Wang, Feng Guo
Journal: Journal of Translational Medicine (2018): 169

Ubiquitin ligase CHIP functions as an oncogene and activates the AKT signaling pathway in prostate cancer
Authors: Li Cheng, Jin Zang, Han-Jue Dai, Feng Li, Feng Guo
Journal: International journal of oncology (2018)

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