Cell Navigator 活细胞内质网染色试剂盒是美国AAT Bioquest生产的内质网染色试剂盒 ，内质网（ER）是真核生物细胞中的一种细胞器，其形成扁平的，膜封闭的囊或称为池状的管状结构的互连网络。 ER的膜与外核膜连续。 ER在大多数类型的真核细胞中发生，但在红细胞和精-子中不存在。 Cell Navigator 活细胞内质网（ER）染色试剂盒使用我们的ER Tracer Green作为ER标记物。 ER Tracer 红色染色是一种细胞渗透性荧光染料，对ER具有高度选择性。 该染色剂由红色荧光染料和ER粘合剂组成，其在大多数细胞类型中选择性地结合ER。 对于某些细胞，ER Tracer Green可能无法选择性地与ER结合。 ER Tracer Green具有与FITC基本相同的光谱特性，使该试剂盒便于使用FITC滤波片组。

样本分析方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞
2.用ER Green red工作溶液在37oC孵育细胞15-30分钟
3.在Ex / Em = 490 / 520nm（FITC滤光片组）下在荧光显微镜下分析细胞

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
ER Green 原液（500X）：
将20μLDMSO（组分C）加入到ER red （组分A）的小瓶中并充分混合以制备500X ER red 储备溶液。 注意：20μL的500X ER red 原液足以容纳一个96孔板。 如果管子密封，未使用的500X ER red 储备溶液可以在≤-20oC下储存两周。 避光。

2.工作溶液配制

将20μL500XER red 储备溶液加入10 mL活细胞染色缓冲液（组分B）中，充分混合，制成ER red 工作溶液。 该ER red 工作溶液在室温下稳定至少2小时。 避光。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

1.在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或50μL/孔（384孔板）的ER red 工作溶液。 用37℃的工作溶液孵育细胞15-30分钟，避光。 注意：ER探针的最佳浓度根据具体应用而有所不同。 浓度高于工作溶液可能对细胞有毒。 可以根据特定细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性来修改染色条件。

2.在每个孔中移除ER red 工作溶液。 用物理相关缓冲液洗涤细胞三次。

3.染色后修复细胞（可选）。 用4％甲醛固定细胞5-10分钟。 用物理相关缓冲液洗涤细胞三次。

4.使用具有FITC滤光片组（Ex / Em = 490 / 520nm）的荧光显微镜观察细胞中的荧光信号。

数据分析

参考文献

Teleost-Specific TLR19 Localizes to Endosome, Recognizes dsRNA, Recruits TRIF, Triggers both IFN and NF-$\kappa$B Pathways, and Protects Cells from Grass Carp Reovirus Infection
Authors: Jianfei Ji, Youliang Rao, Quanyuan Wan, Zhiwei Liao, Jianguo Su
Journal: The Journal of Immunology (2018): 573--585