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Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒
物品单位 价格 品牌
4584 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:200 Tests
  • 货号:CS13843
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS13843
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 200 Tests
是否进口
简要概述

Amplite 荧光法黄嘌呤检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测黄嘌呤 的试剂盒,黄嘌呤是在大多数人体组织和液体中发现的嘌呤碱。 许多兴奋'剂来源于黄嘌呤,包括咖啡'因,氨茶碱,IBMX,旁黄嘌呤,己酮可可碱,可可碱和茶碱,它们可以刺激心率,收缩力,高浓度的心'律失'常。 因此,检测生物样品中的黄嘌呤变化对于疾'病诊'断和治'疗监测是重要的。 Amplite 荧光黄嘌呤测定试剂盒为黄嘌呤的测量提供了快速且超灵敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式进行。 黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶存在下氧化成尿酸以释放过氧化氢,其可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 540nm / 590nm下用Amplite Red特别测量。 使用Amplite 荧光黄嘌呤测定试剂盒,在100μL反应体积中检测到低至0.4μM的黄嘌呤。


适用仪器


荧光酶标仪
激发: 540nm
发射: 590nm
cutoff: 570nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备黄嘌呤标准品或测试样品(50 μL)
2.添加黄嘌呤工作溶液(50 μL)
3.在室温下孵育30-60分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm时读取荧光强度

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液(250X):
在Amplite Red底物(组分A)的小瓶中加入40 μL DMSO(组分F)。 注意:Amplite Red底物在硫醇(例如二硫苏糖醇(DTT)和2-巯基乙醇)的存在下不稳定。 反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10 μM。 由于Amplite Red在pH> 8.5时不稳定,因此应在pH 7-8(建议pH 7.4)下进行测定。

1.2 HRP储备溶液(500X):
将100 μL测定缓冲液(组分B)加到辣根过氧化物酶(组分C)小瓶中。

1.3 黄嘌呤氧化酶(XO)储备溶液(100X):
向小瓶黄嘌呤氧化酶(组分E)中加入100 μL测定缓冲液(组分B)制成黄嘌呤氧化酶(XO)储备液(100X)。

2.标准溶液配制

黄嘌呤标准品
将5 μL黄嘌呤标准品(组分D)添加到995 μL测定缓冲液(组分B)中,得到100 μM黄嘌呤标准溶液。 取200 μL 100 μM黄嘌呤标准溶液进行1:3连续稀释,以得到连续稀释的黄嘌呤标准液(X1-X7)。

3.工作溶液配制

将20μL的Amplite Red底物储备液(250X),10μL的HRP储备液(500X)和50μL的黄嘌呤氧化酶储备液(100X)加到5 mL的测定缓冲液(组分B)中,制成总体积 5.08毫升。 注意:避免直接暴露在光线下并立即使用。

样品操作及实验分析

表1.黑色壁/实心底部96孔微孔板中黄嘌呤标准品和测试样品的布局。 X =黄嘌呤标准品(X1-X7,0.137至100 μM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
X1 X1 ... ...
X2 X2 ... ...
X3 X3
X4 X4
X5 X5
X6 X6
X7 X7

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
X1-X7 50ul 连续稀释(0.137至100 μM)
BL 50ul 分析缓冲液(组分B)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和表2提供的布局,准备黄嘌呤标准品(X),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 μL试剂,而不是50 μL。

2.在黄嘌呤标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50 μL黄嘌呤工作溶液,使总黄嘌呤测定体积为100 μL /孔。 对于384孔板,请向每个孔中添加25 μL工作溶液,总体积为50 μL /孔。

3.在避光条件下,于室温下孵育反应30至60分钟。

4.使用酶标仪在激发= 530-570 nm(最佳540 nm),发射= 590-600 nm(最佳590 nm),截止= 570 nm的条件下监控荧光的增加。


参考文献

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