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ReadiLink DIG (Digoxigenin) Nick Translation dsDNA Labeling Kit
  • 品牌:AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:10 Reactions
  • 货号:17472
  • 价格: ¥3799/支
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2025-09-18
产品详请
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 17472
用途 Research Grade
包装规格 10 Reactions
纯度 98%%
CAS编号
是否进口
简要概述

ReadiLink DIG 缺口平移 dsDNA 标记试剂盒提供了一种简单有效的方法,可以使用明亮且光稳定的 DIG染料标记双链 DNA 样本。标记试剂盒为 DNA 标记所需的完整工作流程提供了所有必要的试剂。该方法使用 DNAse 和 DNA 聚合酶的组合来切割 DNA 螺旋的一条链,DIG染料与之结合。此外,该试剂盒允许用户通过调整 DIG-dUTP 偶联物与 dTTP 的比例来优化掺入和产品大小。它与多种样品材料兼容,包括细菌人工染色体 (BAC) DNA、人类基因组 DNA、纯化的 PCR 产物、超螺旋和线性化质粒 DNA。得到的 DIG标记 DNA 可用于多种分子生物学技术,例如荧光原位杂交 (FISH)。


适用仪器


热循环仪
仪器规格: N/A


产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备 DNA 样本
  2. 向试管中加入试剂
  3. 短暂混合并离心
  4. 在 15°C 下孵育 60 分钟
  5. 将反应置于冰上,然后加入停止溶液并在 65°C 下加热
  6. 使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存
  7. 纯化标记的 DNA

注:在开始实验之前,解冻所有成分。在开始标记过程之前,将所有试剂短暂涡旋至底部。


实验步骤

表 1. 各反应每管试剂组成

成分 规格
DNA样本 1 μg DNA 在无核酸酶水中稀释至终体积 34 μL
Nick Translation 缓冲液 5 μL
dNTP 混合物 5 μL
dTTP 2 μL
DIG-dUTP 工作溶液 2 μL
DNA聚合酶I 1 μL
DNA酶I 1 μL
总容积 50 μL
可以优化DIG-dUTP(组分 A):dTTP(组分 E)的比例以获得 标记条件。
可以优化孵育时间以获得更好的标记。 更长的孵育时间将有助于更多的标记,但可能会缩短最终产品的尺寸。
1.向干净的(无核酸酶)0.5 mL 微型离心管或 0.2 mL PCR 管中,按表 1 中所示的顺序添加试剂。
2.通过短暂的涡旋和短暂的离心小心混合试剂。
3.将反应在 15°C 下孵育 60 分钟。
4.孵育后,将反应置于冰上。
5.要终止反应,请添加 5 μL 停止溶液并将样品加热至 65 °C。
6.使用前在冰上放置 5 分钟或在 4°C 下储存。
7.纯化标记的 DNA。
参考文献

[In situ hybridization of cells infected by Chlamydia trachomatis].
Authors: Mortemousque, B and Verin, P and Bebear, C and de Barbeyrac, B and Gendre, P
Journal: Revue internationale du trachome et de pathologie oculaire tropicale et subtropicale et de sante publique : organe de la Ligue contre le trachome avec la collaboration de l'International Organization against Trachoma et des organisation... (1994): 47-62

Use of M13 single-stranded DNA digoxigenin labelled probe for detection of human parvovirus B19 viraemia.
Authors: Prato, C and Paper, T and Morinet, F
Journal: Journal of virological methods (1991): 227-31

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