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Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒 蓝色荧光
物品单位 价格 品牌
3924 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 kit
  • 货号:CS12602
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS12602
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 kit
是否进口
简要概述

Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于β-半乳糖苷酶 的试剂盒,神经氨酸酶,也称为唾液酸酶,是糖苷水解酶,其催化末端唾液酸残基和神经氨酸的水解。最常见的神经氨酸酶是病毒神经氨酸酶。唾液酸和邻近糖残基之间的连接的切割允许病毒通过粘蛋白转运并破坏宿主细胞上的血凝素受体,从而允许从感染细胞中洗脱后代病毒颗粒。神经氨酸酶促进感染细胞释放流感病毒,并促进病毒在呼吸道内传播。因此,它是流感药物开发的重要目标。神经氨酸酶的检测和筛选其抑制剂是研究生物过程和预防流感感染的重要任务之一。有一些检测试剂盒可用于检测神经氨酸酶,但所有商业上可用的试剂盒使用起来都很繁琐。我们的Amplite 荧光神经氨酸酶检测试剂盒提供灵敏且稳定的荧光测定法,可检测细胞或生物样品中存在的神经氨酸酶。在神经氨酸酶切割后,非荧光神经氨酸酶底物变为强荧光。该试剂盒可在100μL测定体积中检测低至0.3 mU / mL的神经氨酸酶。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行,并且易于适应自动化而无需分离步骤。荧光酶标仪在Ex / Em = ~320 / ~450nm处可以容易地读取信号。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 320nm
发射: 460nm
cutoff: 460nm
推荐孔板: 白色孔板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备神经氨酸酶工作溶液(50 μL)
2.加入神经氨酸酶标准品或测试样品(50 μL)
3.在37°C或室温下孵育1-2小时
4.监控Ex / Em = 320/460 nm(截止= 420 nm)的荧光增加

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样,并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 神经氨酸酶标准溶液(2U / mL):
将50 μL ddH2O加入小瓶神经氨酸酶标准品(组分C)中,制成约2 U / mL神经氨酸酶标准溶液。

1.2 FluLite 蓝色原液(200X):
将50 μL ddH2O加入FluLite Blue(组分A)小瓶中,制成200X储备溶液。

 

2.标准溶液

神经氨酸酶标准品
将10 μL的2 U / mL神经氨酸酶标准储备液加到990 μL的测定缓冲液(组分B)中,以生成20 mU / mL的神经氨酸酶标准品(NA7)。 取20 mU / mL神经氨酸酶标准溶液,并按1:2进行系列稀释,以使用分析缓冲液(组分B)获得系列稀释的神经氨酸酶标准品(NA6-NA1)。 注意:稀释的神经氨酸酶标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

 

3.工作溶液

3.1 0.3%β-巯基乙醇测定缓冲液:
将30 μLβ-巯基乙醇(组分F)添加到10 mL反应缓冲液(组分B)中,并充分混合。
注意:制备酶稀释缓冲液需要额外的缓冲液,用于生成标准曲线。

3.2 FDG工作方案:
将25 μL 1X FDG储备溶液加到5 mL的0.3%β-巯基乙醇测定缓冲液中。 注意:请勿将FDG溶液在室温下长时间放置,否则会发生自发水解。

3.3 裂解缓冲液工作液:
将25μL的200X FluLite 蓝色储备溶液添加到5 mL的测定缓冲液(组分B)中并充分混合以制备神经氨酸酶工作溶液。

 

样品操作及分析

表1.黑色固体96孔微孔板中神经氨酸酶标准品和测试样品的布局。 NA =神经氨酸酶标准品(NA1-NA7,0.312至20 mU / mL),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
NA1 NA1 ... ...
NA2 NA2 ... ...
NA3 NA3    
NA4 NA4    
NA5 NA5    
NA6 NA6    
NA7 NA7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
NA1-NA7 50ul 连续稀释(0.312至20 mU / mL)
BL 50ul 空白对照
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局,准备神经氨酸酶标准品(NA),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 μL试剂代替50 μL。

2.向神经氨酸酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中添加50μL神经氨酸酶工作溶液,以使神经氨酸酶测定的总体积为100μL/孔。 对于384孔板,请向每个孔中添加25 μL神经氨酸酶工作溶液,总体积为50 μL /孔。

3.在避光的条件下,将反应在37°C或室温下孵育1至2小时。 注意:37°C孵育可获得更好的结果。

4.用荧光酶标仪监测在Ex / Em = 320/460 nm(截止= 420 nm)处的荧光增加。

 

参考文献

Neuraminidase inhibiting antibody responses in pigs differ between influenza A virus N2 lineages and by vaccine type
Authors: Sandbulte MR, Gauger PC, Kitikoon P, Chen H, Perez DR, Roth JA, Vincent AL.
Journal: Vaccine (2016): 3773

Rapid screening, identification, and purification of neuraminidase inhibitors from Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc. by ultrafiltration with HPLC-ESI-TOF-MS combined with semipreparative HPLC
Authors: Zhang M, Zhao H, Zhao Z, Yan H, Lv R, Cui L, Yuan J, Wang D, Geng Y, Liu D, Wang X.
Journal: J Sep Sci (2016): 2097

Development of a surface plasmon resonance assay to measure the binding affinity of wild-type influenza neuraminidase and its H274Y mutant to the antiviral drug zanamivir
Authors: Somasundaram B, Fee CJ, Fredericks R, Watson AJ, Fairbanks AJ.
Journal: J Mol Recognit (2015): 87

[Susceptibility of human influenza A (H3N2) viruses to neuraminidase inhibitors isolated during 2011-2012 in China]
Authors: Huang W, Tan M, Zhao X, Cheng Y, Li X, Guo J, Wei H, Xiao N, Wang Z, Wang D, Shu Y.
Journal: Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi (2015): 481

Evaluation of the antigenic relatedness and cross-protective immunity of the neuraminidase between human influenza A (H1N1) virus and highly pathogenic avian influenza A (H5N1) virus
Authors: Lu X, Liu F, Zeng H, Sheu T, Achenbach JE, Veguilla V, Gubareva LV, Garten R, Smith C, Yang H, Stevens J, Xu X, Katz JM, Tumpey TM.
Journal: Virology (2014): 169

Neuraminidase-inhibition assay for the identification of influenza A virus neuraminidase virus subtype or neuraminidase antibody specificity
Authors: Pedersen JC.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 27

Partial antiviral activities detection of chicken Mx jointing with neuraminidase gene (NA) against Newcastle disease virus
Authors: Zhang Y, Fu D, Chen H, Zhang Z, Shi Q, Elsayed AK, Li B.
Journal: PLoS One (2013): e71688

Preparation and diagnostic utility of a hemagglutination inhibition test antigen derived from the baculovirus-expressed hemagglutinin-neuraminidase protein gene of Newcastle disease virus
Authors: Choi KS, Kye SJ, Jeon WJ, Park MJ, Kim S, Seul HJ, Kwon JH.
Journal: J Vet Sci (2013): 291

[Evaluation of the anti-neuraminidase antibodies in clinical trials of the live influenza vaccine of the A(H5N2) subtype]
Authors: Smolonogina TA, Desheva Iu A, Rekstin AR, Mironov AN, Rudenko LG.
Journal: Vopr Virusol (2013): 31

The chemiluminescent neuraminidase inhibition assay: a functional method for detection of influenza virus resistance to the neuraminidase inhibitors
Authors: Okomo-Adhiambo M, Hurt AC, Gubareva LV.
Journal: Methods Mol Biol (2012): 95

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