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Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 蓝色荧光
物品单位 价格 品牌
2604 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 kit
  • 货号:CS11952
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS11952
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 kit
是否进口
简要概述

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶 的试剂盒,碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中,其中以肝脏为最多其次为肾'脏,骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团,从而使DNA 或RNA'片段的5’-P末端转换成5’-OH末端,并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶,而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化,Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析(特别是免疫分析)和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 *蓝色荧光* 用MUP,一种碱性磷酸酶的蓝色荧光底物来定量检测溶液中、细胞抽提液,固相物质表面(例如PVDF膜)的碱性磷酸酶活性。本试剂盒提供所有必须成分,包括我们最佳的产品组合和分析方法,并且与可用于HTS(高通量筛选)。


适用仪器


荧光酶标仪
激发: 360nm
发射: 450nm
cutoff: 435nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液(50μL)
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品(50μL)
3.在室温或37°C孵育10 - 30分钟
4.监测Ex / Em = 360/450 nm处的荧光强度(截止= 435 nm)

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 MUP Plus 原液(250X):
将100μL无菌H2O加入到MUP Plus (组分A)的小瓶中,制成250X MUP Plus 原液。 应立即使用MUP Plus 原液。

1.2 碱性磷酸酶标准溶液(100 mU / mL):
加入100μL含0.1%BSA(H2O-0.1%BSA)的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品(组分C,10单位),得到100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1%BSA中,生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL标准溶液,在H2O-0.1%BSA中进行1:10,得到100 mU / mL标准溶液(AS7)。 然后取100 mU / mL标准溶液(AS7),在H2O-0.1%BSA中进行1:3连续稀释,得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品(AS6-AS1)。 注意:应丢弃未使用部分稀释的碱性磷酸酶标准溶液。

3.工作溶液

将20μL250XMUP Plus 储备溶液加入5 mL分析缓冲液(组分B)中,制成碱性磷酸酶工作溶液。 注意:避光。 为每个实验准备新鲜的碱性磷酸酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

表1.在实心黑色96孔微孔板中的碱性磷酸酶标准品和测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品(AS1-AS7,0.1-100mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1 ... ...
AS2 AS2 ... ...
AS3 AS3
AS4 AS4
AS5 AS5
AS6 AS6
AS7 AS7

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释液(0.1至100 mU / mL)
BL 50ul H2O - 0.1% BSA
TS 50ul 测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸盐测定:

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品(AS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液,使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液,总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟,避光。

1.4用荧光板读数器在激发= 360±10nm,发射= 450±10nm(截止= 435nm)监测荧光增加。


2.在细胞中进行碱性磷酸酶测定:

2.1根据需要处理细胞。

2.2向每个细胞孔中加入等体积的碱性磷酸酶工作溶液(例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板)。 注意:或者,从细胞板中取出生长培养基,用5 mL蒸馏水稀释5 mL碱性磷酸酶工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL(对于96孔板)或50μL(对于384孔板)1:1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟,避光。

2.4用荧光板读数器在激发= 360±10nm,发射= 450±10nm(截止= 435nm)监测荧光增加。


参考文献

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Journal: Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery (2017)

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Journal: Journal of agricultural and food chemistry (2010): 4719--4724

Regulation of the osteoblast-specific transcription factor Osterix by NO66, a Jumonji family histone demethylase
Authors: Krishna M Sinha, Hideyo Yasuda, Madelene M Coombes, Sharon YR Dent, Benoit De Crombrugghe
Journal: The EMBO journal (2010): 68--79

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