Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶 的试剂盒，碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾'脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA'片段的5’-P末端转换成5’-OH末端，并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析（特别是免疫分析）和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 *蓝色荧光* 用MUP，一种碱性磷酸酶的蓝色荧光底物来定量检测溶液中、细胞抽提液，固相物质表面（例如PVDF膜）的碱性磷酸酶活性。本试剂盒提供所有必须成分，包括我们最佳的产品组合和分析方法，并且与可用于HTS（高通量筛选）。

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 - 30分钟
4.监测Ex / Em = 360/450 nm处的荧光强度（截止= 435 nm）

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 MUP Plus 原液（250X）：
将100μL无菌H2O加入到MUP Plus （组分A）的小瓶中，制成250X MUP Plus 原液。 应立即使用MUP Plus 原液。

1.2 碱性磷酸酶标准溶液（100 mU / mL）：
加入100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），得到100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。 取1,000 mU / mL标准溶液，在H2O-0.1％BSA中进行1:10，得到100 mU / mL标准溶液（AS7）。 然后取100 mU / mL标准溶液（AS7），在H2O-0.1％BSA中进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS6-AS1）。 注意：应丢弃未使用部分稀释的碱性磷酸酶标准溶液。

3.工作溶液

将20μL250XMUP Plus 储备溶液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，制成碱性磷酸酶工作溶液。 注意：避光。 为每个实验准备新鲜的碱性磷酸酶工作溶液。

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样品操作及分析

表1.在实心黑色96孔微孔板中的碱性磷酸酶标准品和测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1-100mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.在上清液中进行碱性磷酸盐测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。

1.4用荧光板读数器在激发= 360±10nm，发射= 450±10nm（截止= 435nm）监测荧光增加。

2.在细胞中进行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2向每个细胞孔中加入等体积的碱性磷酸酶工作溶液（例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板）。 注意：或者，从细胞板中取出生长培养基，用5 mL蒸馏水稀释5 mL碱性磷酸酶工作溶液。 然后向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.4用荧光板读数器在激发= 360±10nm，发射= 450±10nm（截止= 435nm）监测荧光增加。

参考文献

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