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Amplite 比色法丁酰胆碱酯酶活性检测试剂盒
物品单位 价格 品牌
6564 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:100 Tests
  • 货号:CS11406
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS11406
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 100 Tests
是否进口
简要概述

丁酰胆碱酯酶(EC 3.1.1.8; BChE),也称为假胆碱酯酶或血浆胆碱酯酶,主要在肝脏中合成,并存在于血液中。BChE是一种非特异性胆碱酯酶,可以水解许多不同的胆碱酯,是抵御有毒化合物进入血液的第一道防线。它已被鉴定为有机磷酸中毒的临床生物标志物。Amplite 比色丁酰胆碱酯酶活性测定试剂盒是合成的丁酰胆碱酯类底物,可被BChE水解并产生硫代胆碱。硫胆碱可与5、5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)反应,并生成黄色发色团,可在410 nm处检测到。该测定方便,灵敏,并且在各种样品中均可检测到低至6 mU / mL。

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 410 ± 5 nm
推荐孔板: 透明底板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备BChE标准品,测试样品和染料工作溶液
  2. 添加BChE标准品或测试样品(100 uL)
  3. 添加BChE染料工作溶液(100 uL)
  4. 在室温下孵育10-30分钟
  5. 检测410±5 nm处的吸光度

注意:开始实验前,在室温下解冻试剂盒所有成分。

 

溶液配制

储备溶液配制

1.DTNB储备溶液(10倍):将1.2 mL测定缓冲液(组分B)添加到DTNB(组分A)小瓶中,制成10X DTNB储备溶液,避光。 注意:DNTB不易溶解,看到溶液混浊是正常的。 可以将上清液或混合物用于实验。

2.丁硫代胆碱(BTC)储备溶液(100X):将120 uL ddH2O加入BTC小瓶(组分C)中,制成100X BTC储备液。

3.丁胆碱酯酶(BChE)标准溶液(20 U / mL):将50 uL含0.1%BSA的ddH2O添加到小瓶丁酰胆碱酯酶标准溶液(组分D)中,制成20 U / mL丁酰胆碱酯酶标准溶液。

 

标准溶液配制

将20 uL的20 U / mL BChE标准溶液添加到980 uL的测定缓冲液(组分B)中以生成400 mU / mL的BChE标准溶液(BS1)。 然后取400 mU / mL BChE标准溶液(BS7),并在测定缓冲液(组分B)中进行1:2连续稀释,以得到连续稀释的BChE标准溶液(BS2- BS7)。 注意:稀释的BChE标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

 

工作溶液配制

BChE染料工作溶液:将1.0 mL的10 X DTNB储备溶液和100μL的100X BTC储备溶液添加到9 mL的测定缓冲液(组分B)中,使总体积为10.1 mL的BChE染料工作溶液,避光。

 

实验步骤

表1.透明的96孔微孔板中的BChE标准品和测试样品的布局。 BS = BChE标准品(BS1-BS7,400至6.5 mU / mL); BL =空白控件; TS =测试样品

BL

BL

TS

TS

DS1

DS1

DS2

DS2

DS3

DS3

 

 

DS4

DS4

 

 

DS5

DS5

 

 

DS6

DS6

 

 

DS7

DS7

 

 

表2.  每个孔的试剂组成

Well

Volume

Reagent

DS1-DS7

100 uL

连续稀释 (400 to 6.5 mU/mL)

BL

100 uL

缓冲液 (Component B)

TS

100 uL

实验样品

  1. 根据表1和表2提供的布局,准备BChE标准品(BS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 uL的试剂代替100 uL。 注意:根据需要处理细胞或组织样品。

  2. 将100 uL BChE染料工作溶液添加到BChE标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总测定体积为200 uL /孔。 对于384孔板,将25 uL BChE工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 uL /孔。

  3. 在避光条件下,于室温下孵育反应10至30分钟。

  4. 用酶标仪在410±5 nm处检测吸光度的增加。

 

图示

 

图1.使用SpectraMax酶标仪在白色/透明底96孔板中使用Amplite 比色丁酰胆碱酯酶测定试剂盒测量丁酰胆碱酯酶的剂量响应。 孵育10分钟可检测到低至6.0 mU / mL的丁酰胆碱酯酶(n = 3)。

 

参考文献

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