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Amplite 荧光法丁酰胆碱酯酶活性检测试剂盒
物品单位 价格 品牌
6564 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:100 Tests
  • 货号:CS11407
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS11407
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 100 Tests
是否进口
简要概述

丁酰胆碱酯酶(EC 3.1.1.8; BChE),也称为假胆碱酯酶或血浆胆碱酯酶,主要在肝脏中合成,并存在于血液中。BChE是一种非特异性胆碱酯酶,可以水解许多不同的胆碱酯,是抵御有毒化合物进入血液的第一道防线。它已被鉴定为有机磷酸中毒的临床生物标志物。Amplite 比色丁酰胆碱酯酶活性测定试剂盒是合成的丁酰胆碱酯类底物,可被BChE水解并产生硫代胆碱。硫胆碱可与5、5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)反应,并生成黄色发色团,可在410 nm处检测到。该测定方便,灵敏,并且在各种样品中均可检测到低至6 mU / mL。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

  1. 准备BChE标准品,测试样品和染料工作溶液
  2. 添加BChE标准品或测试样品(100 uL)
  3. 添加BChE染料工作溶液(100 uL)
  4. 在室温下孵育10-30分钟
  5. 检测Ex / Em = 490/525nm的荧光强度

注意:开始实验前,在室温下解冻试剂盒所有成分。

 

溶液配制

储备溶液配制

1.Thiolite 绿色原液(200X):将50 uL DMSO(组分E)加入小瓶Thiolite Green(组分A)中,制成200X Thiolite Green储备溶液。

2.丁硫代胆碱(BTC)储备溶液(100X):将120 uL ddH2O加入BTC小瓶(组分C)中,制成100X BTC储备液。

3.丁胆碱酯酶(BChE)标准溶液(5 U / mL):将50 uL含0.1%BSA的ddH2O加入BChE标准品(组分D)小瓶中,制成5 U / mL BChE标准品溶液。

 

标准溶液配制

将20 uL的5U / mL BChE标准溶液添加到980 uL的测定缓冲液(组分B)中,以生成100mU / mL的BChE标准溶液(BS1),然后取100 mU / mL的BChE标准溶液(BS1),并在测定缓冲液(组分B)中进行1:3连续稀释,以得到系列换算的BChE标准溶液(BS2-BS7)。注意:减少的BChE标准溶液溶液,应在4小时内使用。

 

工作溶液配制

BChE染料工作溶液:将50 uL的200X Thiolite Green储备溶液和100 uL的100X BTC储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液(组分B)中,使总体积为10.1 mL BChE染料工作溶液。 注意:避光。

 

实验步骤

表1.在透明的96微孔板中的BChE标准品和测试样品的布局。 BS = BChE标准品(BS1-BS7,100至0.13 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品

BL

BL

TS

TS

DS1

DS1

DS2

DS2

DS3

DS3

 

 

DS4

DS4

 

 

DS5

DS5

 

 

DS6

DS6

 

 

DS7

DS7

 

 

表2.  每个孔的试剂组成

Well

Volume

Reagent

DS1-DS7

100 uL

连续稀释 (100 to 0.13 mU/mL)

BL

100 uL

缓冲液 (Component B)

TS

100 uL

实验样品

  1. 根据表1和表2提供的布局,准备BChE标准品(BS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25 uL的试剂代替100 uL。 注意:根据需要处理细胞或组织样品。

  2. 将100 uL BChE染料工作溶液添加到BChE标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总测定体积为200 uL /孔。 对于384孔板,将25 uL BChE工作溶液添加到每个孔中,总体积为50 uL /孔。

  3. 在避光条件下,于室温下孵育反应10至30分钟。

  4. 使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525nm处检测荧光的增加。

 

图示

 

图1.使用Gemini荧光酶标仪在带有Amplite 荧光丁酰胆碱酯酶检测试剂盒的黑色96孔板上测定丁酰胆碱酯酶的剂量响应。 孵育10分钟可检测到低至0.1 mU / mL的丁酰胆碱酯酶。

 

参考文献

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