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Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 绿色荧光
物品单位 价格 品牌
2604 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 kit
  • 货号:CS11401
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS11401
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 kit
是否进口
简要概述

Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于乙酰胆碱酯酶 的试剂盒,乙酰胆碱酯酶,也就是大家熟知的AChE。它是一种酶,降解(通过其水解活性)神经递质乙酰胆碱,产生胆碱和乙酸基团。它主要被发现在功能性神经肌肉和在中枢神经系统的胆碱突触中,在此,它服务于终端突触传递。AChE具有很高的催化活性,每个AChE分子每秒能降解5000个分子的乙酰胆碱。乙酰胆碱酯酶也在红血细胞膜上被发现,组成Yt血抗原基团。乙酰胆碱酯酶存在多种分子形式,不同的形式具有类似的催化活性,但是他们之间的组装过程以及与细胞表面的黏附存在差异。Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 *绿色荧光* 为检测AChE活性提供了一种最灵敏的方法。本试剂盒使用我们卓越的Thiolite Green来对AChE水解乙酰胆碱形成的硫醇胆碱进行定量检测,Thiolite Green的绿色荧光强度与形成的硫醇胆碱成比例关系,因此可以反应AChE的活性。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 490nm
发射: 525nm
cutoff: 515nm
推荐孔板: 黑色孔板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备AChE工作溶液(50μL)
2.添加AChE标准品和/或AChE测试样品(50μL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光强度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Thiolite Green原液(200X):
将50μLDMSO(组分E)加入到Thiolite Green(组分A)的小瓶中以制备200X Thiolite Green原液。

1.2 乙酰硫代胆碱原液(500X):
将0.6mL ddH2O加入乙酰硫代胆碱(组分C)的小瓶中。

1.3 乙酰胆碱酯酶标准储备液:
将100μL含0.1%BSA的ddH2O加入到乙酰胆碱酯酶标准品(组分D)的小瓶中,制成50U / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液。

 

2.标准溶液

乙酰胆碱酯酶标准
将20μL的50U / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液加入到980μL测定缓冲液(组分C)中以产生1000mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液。 取1000 mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液以1:10进行,得到100 mU / mL乙酰胆碱酯酶标准溶液(AS7)。然后进行1:3连续稀释以获得剩余的连续稀释的乙酰胆碱酯酶标准品(AS6-AS1)。 注意:稀释的乙酰胆碱酯酶标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

 

3.工作溶液

将10μL乙酰硫代胆碱储备溶液(500X)和25μLThiolite Green储备溶液(200X)加入5mL测定缓冲液(组分B)中,使总体积为5.03mL乙酰胆碱酯酶(AChE)工作溶液。 注意:AChE不稳定,需要在30分钟内使用,避光。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中乙酰胆碱酯酶标准品和测试样品的布局。 AS =乙酰胆碱酯酶标准品(AS1-AS7,0.01至100mU / mL),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1 ... ...
AS2 AS2 ... ...
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释(0.01至100 mU / mL)
BL 50ul 分析缓冲液(组分B)
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备乙酰胆碱酯酶标准品(AS),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向乙酰胆碱酯酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLAChE工作溶液,使总乙酰胆碱酯酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLAChE工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至30分钟,避光。

4.用Ex / Em = 490 / 520nm的荧光酶标仪监测荧光增加。

 

参考文献

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Gongjin-Dan Enhances Hippocampal Memory in a Mouse Model of Scopolamine-Induced Amnesia
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