Amplite 荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料 。荧光胺本质上是非荧光性的，但是一旦与脂肪胺类（包括：多肽、蛋白质）反应便会产生一种带蓝绿色荧光的衍生物。Amplite荧光法荧光胺蛋白质定量试剂盒提供了一种在水溶液中对蛋白质进行定量检测的简单方法。它的荧光信号可以容易读出Ex/Em = 380 /470 nm。该Amplite 荧光胺蛋白质检测法可以便捷地用于96或384微孔板分析中，并且无需任何分步操作就可以容易地实现自动化。本检测法可以在30分钟内完成。用Amplite 荧光胺蛋白质检测试剂盒，可以检出少至3 ug/mL的BSA。

样品实验方案

简要概述

1.准备荧光胺工作溶液（25μL）
2.添加BSA标准品或测试样品（75μL）
3.在室温下孵育5-30分钟
4.在Ex / Em = 380 / 470nm处读取荧光强度

溶液制备 

1.1标准溶液

BSA标准
通过进行1：2连续稀释，将适量的BSA标准品1 mg / mL（组分C）稀释到PBS中，以获得BSA标准品（BS7-BS1）的连续稀释液。

2.工作溶液

将DMSO（组分B）的全部内容物加入荧光胺（组分A）的瓶中，并充分混合。 注意：2.5 mL的荧光胺工作溶液足以用于1个平板。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中BSA标准品和测试样品的布局。 BS = BSA标准品（BS1-BS7,1.563至100μg/ mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备BSA标准品（BS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用30μL试剂代替75μL。

2.向BSA标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入25μL荧光胺工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入10μL荧光胺工作溶液，总体积为40μL/孔。

3.在室温下孵育反应5至30分钟，避光。

4.用Ex / Em = 380 / 470nm的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Covalent vaccination with Trypanosoma cruzi Tc24 induces catalytic antibody production
Authors: Sarah M Gunter, Leroy Versteeg, Kathryn M Jones, Keegan P Brian, Ulrich Strych, Maria Elena Bottazzi, Peter J Hotez, Eric L Brown
Journal: Parasite immunology (2018): e12585