Amplite 比色法超氧化物歧化酶（SOD）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测超氧化物歧化酶 的试剂盒，超氧化物歧化酶（SOD）是一类催化超氧化物歧化成氧和过氧化氢的酶。超氧化物是细胞中主要的活性氧物质之一。它与神经退行性疾病，缺血再灌注损伤，动脉粥样硬化和衰老有关。SOD是几乎所有暴露于超氧自由基的细胞的重要抗氧化防御剂。据报道，缺乏SOD1的小鼠出现了广泛的病理，包括肝细胞癌，年龄相关的肌肉质量减少，早期白内障发病率和寿命缩短。SOD的过表达保护小鼠纤维肉瘤细胞免于凋亡并促进细胞分化。

Amplite 比色超氧化物歧化酶检测试剂盒为测量SOD提供了一种快速灵敏的比色法。如图所示，黄嘌呤通过黄嘌呤氧化酶（XO）转化为超氧自由基离子（O2-·），尿酸和过氧化氢。超氧化物与ReadiView SOD560发生反应，生成吸收560nm左右的产品。SOD竞争ReadiView SOD 560与超氧化物的反应，从而减少560 nm处的吸收。 ReadiView SOD 560在560 nm处的吸收减少与SOD活性成正比。该试剂盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。 

96孔板测定示例

概述

SOD标准品或测试样品（50μL）

添加SOD测定混合物（25μL）

添加酶反应混合物（25μL）

在室温下孵育10-30分钟读取560 nm处的吸光度

注意：在开始实验之前，将所有试剂盒组分解冻至室温。

操作方法

1.Parepare系列SOD（0至100 U / mL）标准溶液：

1.1将50μL测定缓冲液（组分E）加入到SOD标准品（组分D）的小瓶中以制备10kU / mL SOD储备溶液。

注意：未使用的SOD溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

1.2在990μL分析缓冲液（组分E）中加入10μL10kU / mL SOD溶液，得到100 U / mL SOD溶液。取100μL的100 U / mL SOD溶液进行1:10连续稀释，然后进行1：3稀释，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03 U / mL SOD标准溶液。

1.3如说明书中表1和2所述，将SOD标准品和含SOD的测试样品添加到96孔白壁/透明底或透明微孔板中。

2.Parepare SOD测定混合物1：

2.1将2.5 mL测定缓冲液（组分E）加入ReadiView SOD560（组分A）瓶中，充分混合。

2.2将50μL50X黄嘌呤（组分B）加入组分A（来自步骤2.1）的瓶中以制备SOD测定混合物。

注意：SOD测定混合物应在实验前准备好，避光。 测定混合物不稳定，应丢弃未使用的部分。

3.Parepare SOD测定混合物2：

3.1将50μL测定缓冲液加入到黄嘌呤氧化酶（组分C）的小瓶中，并将50μL黄嘌呤氧化酶原液转移到2.5mL测定缓冲液（组分E）中以制备SOD测定混合物2，充分混合。

3.1将25μLSOD测定混合物1（来自步骤2.2）添加到SOD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤1，说明书表1和2）。

3.2将25μLSOD测定混合物2（来自步骤3）加入SOD标准品，空白对照和测试样品（来自步骤4.1）的每个孔中。

注意：对于384孔板，将25μL样品，12.5μLSOD测定混合物1和12.5μLSOD测定混合物2加入每个孔中。

3.3在室温下孵育30-60分钟。

3.4监测550至560nm的吸光度强度。

参考文献

Intercomparative investigation of the total phenols, total flavonoids, In vitro and In vivo antioxidant activities of capparis Cartilaginea (Decne.) maire and weiller and Capparis Ovata Desf. from Jordan
Authors: Mahmoud A Al-Qudah, Safwan M Obeidat, Riyadh Muhaidat, Bahaa Al-Trad, Hala I Al-Jaber, Jamil N Lahham
Journal: Pharmacognosy Magazine (2018): 154