Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化物 的试剂盒，过氧化氢是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。 它涉及许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病血管病变，骨质疏松症，许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学事件。 这种活性物质的测量有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Cell Meter 细胞内荧光过氧化氢检测试剂盒使用我们独特的OxiVision Blue过氧化物传感器来定量活细胞中的过氧化氢。 OxiVision 蓝色过氧化物传感器具有细胞渗透性，当与过氧化氢反应时会产生蓝色荧光。 该试剂盒提供了一种监测活细胞中过氧化氢水平的灵敏工具，并且它被优化用于荧光显微镜。

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞
2.用OxiVision 蓝色过氧化物传感器染色细胞
3.用测试化合物处理细胞
4.用DAPI滤光片或Ex / Em = 405 / 450nm监测荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. OxiVision 蓝色过氧化物原液（500X）：
将40μLDMSO（组分C）加入到OxiVision 蓝色过氧化物（组分A）的小瓶中并充分混合以制备500X OxiVision 蓝色过氧化物传感器储备溶液。 注意：20μL重组的OxiVision 蓝色过氧化物传感器储备溶液足以用于1个平板。 应立即使用原液。 避光。

2.工作溶液

将10μL500XOxiVision 蓝色过氧化物储备溶液加入500μL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成OxiVision 蓝色过氧化物工作溶液。 注意：此OxiVision 蓝色过氧化物工作溶液不稳定; 使用前根据需要准备。

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样品分析

1.添加10μL/孔（96孔板）或2.5μL/孔（384孔板）的OxiVision 蓝色过氧化物工作溶液，每孔90μL细胞培养物，96孔板或22.5μL细胞培养物在384孔细胞板中。注意：染色前无需清洗细胞。建议在完全培养基中染色细胞。

2.用测试化合物在完全培养基或37℃的所需缓冲液中处理细胞一段所需的时间。对于对照样品（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。注意：建议在完全培养基中处理细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在治疗前吸出生长培养基和血清因子。抽吸后，将1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液加入细胞中。或者，可以在无血清培养基中处理细胞。我们用完全培养基中的100μM过氧化氢在37℃处理Jurkat细胞90分钟以诱导过氧化氢。详细信息请参见图1。

3.用DPBS洗涤细胞1-2次，并用100uL /孔（对于96孔板）或25uL /孔（对于384孔板）替换测定缓冲液（组分C）。

4.使用带DAPI过滤器的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Plasma-activated medium selectively eliminates undifferentiated human induced pluripotent stem cells
Authors: Ryo Matsumoto, Kazunori Shimizu, Takunori Nagashima, Hiromasa Tanaka, Masaaki Mizuno, Fumitaka Kikkawa, Masaru Hori, Hiroyuki Honda
Journal: Regenerative Therapy (2016): 55--63