Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化物 的试剂盒，过氧化氢是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关事件的关键调节剂。 它涉及许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病血管病变，骨质疏松症，许多神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学过程。 这种活性物质的测量有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。 Cell Meter 细胞内荧光过氧化氢检测试剂盒使用我们独特的OxiVision Green过氧化物传感器来定量活细胞中的过氧化氢。 OxiVision 绿色过氧化物传感器具有细胞渗透性，当与过氧化氢反应时会产生绿色荧光。 该试剂盒提供了一种监测活细胞中过氧化氢水平的敏感工具，并且它被优化用于流式细胞术。

样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中制备细胞
2.使用OxiVision Green过氧化物染色细胞
3.用测试化合物处理细胞
4.用流式细胞仪FITC通道监测荧光强度（Ex / Em = 490/530 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. OxiVision 绿色过氧化物传感器原液：
将100μLDMSO（组分B）加入到OxiVision 绿色过氧化物（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：1μL重组的OxiVision 绿色过氧化物储备溶液适用于0.5 mL细胞。 应立即使用原液,避光。

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样品分析

1.使用OxiVision 绿色过氧化物传感器储备溶液在完全培养基或37°C所需缓冲液中染色细胞30分钟，避光。

2.用测试化合物在完全培养基或37℃的所需缓冲液中处理细胞一段所需的时间。对于对照样品（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。注意：建议在完全培养基中处理细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在治疗前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后，将细胞重悬于1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液中。或者，可以在无血清培养基中处理细胞。注意：我们用完全培养基中的100μM过氧化氢在37°C处理Jurkat细胞90分钟以诱导过氧化氢。详细信息请参见图1。

3.用测试化合物在37℃处理细胞一段所需的时间。取出处理溶液，然后用OxiVision 绿色过氧化物传感器储备液在全培养基或37°C所需的缓冲液中染色细胞一段所需的时间。

4.使用流式细胞仪监测FITC通道（Ex / Em = 490 / 530nm）的荧光强度。

参考文献

Role of Polydopamine’s Redox-Activity on its Pro-oxidant, Radical-Scavenging, and Antimicrobial Activities
Authors: Huan Liu, Xue Qu, Haoqi Tan, Jialin Song, Miao Lei, Eunkyoung Kim, Gregory F Payne, Changsheng Liu
Journal: Acta Biomaterialia (2019)

Plasma-activated medium selectively eliminates undifferentiated human induced pluripotent stem cells
Authors: Ryo Matsumoto, Kazunori Shimizu, Takunori Nagashima, Hiromasa Tanaka, Masaaki Mizuno, Fumitaka Kikkawa, Masaru Hori, Hiroyuki Honda
Journal: Regenerative Therapy (2016): 55--63