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Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒 蓝色
物品单位 价格 品牌
2604 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 kit
  • 货号:CS11551
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS11551
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 kit
是否进口
简要概述

Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶 的试剂盒,过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小,因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比,过氧化酶也更便宜;其主要缺点是在保护剂(例如叠氮化钠)存在的条件下溶解性低;而在低浓度下,过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA(酶联免疫吸附实验)、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue,我们的超灵敏HRP显色底物,即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物,它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物(例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue)具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质,在664nm处有最大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA,酶促反应动力学分析,氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过最优化处理,并且可用于高通量液体处理设备。

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 664 ± 5 nm
推荐孔板: 透明底板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液(50μL)
2.添加HRP标准品和/或测试样品(50μL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备液(100X):
将250μLDMSO(组分E)加入到Amplite 蓝色底物(组分A)的小瓶中以制备100X Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液(20 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分C)加入到HRP小瓶(组分D)中以制备20U / mL HRP储备溶液。

1.3 H2O2溶液(20 mM):
将22.7μL的3%H2O2(0.88M,组分B)加入977μL的测定缓冲液(组分C)中以制备20mM H2O2溶液。 注意:稀释的H2O2溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

 

2.标准溶液

HRP标准
将15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的测定缓冲液(组分C)中,得到300mU / mL的HRP标准溶液(SD7)。 取300 mU / mL HRP标准溶液(SD7),进行1:3连续稀释,得到连续稀释的HRP标准品(SD6 - SD1)和分析缓冲液(组分C)。

 

3.工作溶液

将50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate储备液(100X)和50μL的H2O2储备溶液(20 mM)加入到4.9 mL的分析缓冲液(组分C)中,使总体积为5 mL的HRP工作溶液,避光。

 

样品分析

表1.白壁/透明底96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品(SD1-SD7,0.3至300 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
SD1 SD1 ... ...
SD2 SD2 ... ...
SD3 SD3    
SD4 SD4    
SD5 SD5    
SD6 SD6    
SD7 SD7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
SD1-SD7 50ul 连续稀释(0.3至300 mU / mL)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品(SD),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液,使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLHRP工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟,避光。

4.用吸光度读板仪在664±5nm下监测吸光度。

 

参考文献

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Recent advances in catalytic peroxidase histochemistry
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