Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测谷氨酸的试剂盒 ，谷氨酸是20种蛋白质氨基酸之一。 羧酸根阴离子和谷氨酸盐被称为谷氨酸。 谷氨酸是一种重要的神经递质，在长期增强中起关键作用，对学习和记忆很重要。 谷氨酸是GABA的前体，但具有相反的功能; 它可能在心'脏和前'列腺的正常功能中发挥作用。 作为跨越血'脑'屏'障的少数营养素之一，谷氨酸用于治'疗诸如抑'郁'症'，ADD和ADHD，疲劳，酗酒，癫'痫，肌'肉'萎'缩，精神发育迟滞和精'神'分'裂'症等疾病。

Amplite 荧光谷氨酸检测试剂盒为各种生物样品中谷氨酸的测量提供了一种快速而灵敏的方法。 在该测定中，偶联酶系统催化L-谷氨酸和NADP之间的反应以产生NADPH，其被NADPH特异性识别并再循环回NADP。 在反应过程中产生红色荧光产物。 可以通过荧光酶标仪在Ex / Em = 530-570nm / 590-600nm（最佳Ex / Em = 540nm / 590nm）或576±5nm处的吸光度酶标仪读取信号。 使用我们的Amplite 荧光谷氨酸试剂盒，我们在100μL反应体积中检测到少至1μM的谷氨酸。 该检测是稳定的，并且可以容易地适用于需要测量谷氨酸的各种应用。

96孔板测定示例

概述

制备谷氨酸测定混合物（50μL）

加入谷氨酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟 -  2小时检测荧光增加，Ex / Em = 540/590 nm

操作方法

1.准备NADP储备液（200X）：

将100μL稀释缓冲液（组分E）加入到NADP（组分C）的小瓶中以制备200X NADP储备溶液。

注意：未使用的NADP储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

2.准备谷氨酸储备液：

将200μL稀释缓冲液（组分E）加入小瓶谷氨酸（组分D）中以制备100mM谷氨酸储备溶液。

注意：未使用的谷氨酸储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存于-20℃。

3.准备谷氨酸测定混合物：

3.1将10 mL测定缓冲液（组分B）加入酶混合物瓶（组分A）中。

3.2将50μL200XNADP储备液（来自步骤1）加入酶混合物瓶（来自步骤3.1），并充分混合。

注意：这种谷氨酸测定混合物足以用于两个96孔板。 未使用的谷氨酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

4.准备连续稀释的谷氨酸标准品（0至1 mM）：

4.1将10μL谷氨酸储备溶液（来自步骤2）加入990L稀释缓冲液（组分E）中以产生1mM谷氨酸标准溶液。

注意：稀释的谷氨酸标准溶液不稳定。 在2小时内使用。

4.2取200μL的1mM谷氨酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM连续稀释的谷氨酸标准品。

4.3如说明书中表1和2所述，将连续稀释的谷氨酸标准品和含有谷氨酸的测试样品加入到96孔板中。

5.运行谷氨酸测定：

5.1将50μL谷氨酸测定混合物（来自步骤3）添加到谷氨酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤4.3）以使总谷氨酸测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL谷氨酸测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3通过在Ex / Em = 530-570 / 590-600nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）下使用荧光检测荧光。

注意：也可以将板中的混合物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Presenilin-1/γ-secretase controls glutamate release, tyrosine phosphorylation, and surface expression of N-methyl-d-aspartate receptor (NMDAR) subunit GluN2B
Authors: Zhao Xuan, Gael Barthet, Junichi Shioi, Jindong Xu, Anastasios Georgakopoulos, Julien Bruban, Nikolaos K Robakis
Journal: Journal of Biological Chemistry (2013): 30495--30501