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Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒
物品单位 价格 品牌
5244 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:200 Tests
  • 货号:CS10085
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-25
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS10085
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 200 Tests
是否进口
简要概述

Amplite 比色法α-酮戊二酸定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料 。α-酮戊二酸(α-酮戊二酸)是克雷布斯循环中的关键分子,其决定了生物体的柠檬酸循环的总体速率。作为谷氨酸和谷氨酰胺的前体,α-酮戊二酸也是胃肠道细胞的中枢代谢燃料。它可以降'低蛋'白'质分'解'代'谢并增加蛋白质合成,从而增强骨骼肌中的骨组织形成,并可用于临'床应用。 α-酮戊二酸用于肾'脏疾病;肠道和胃'部疾病,包括细'菌感染;肝脏问题;白'内'障;和反复发酵的酵母菌感染。它还用于改善接受血液透析治'疗的肾'病患者处理蛋白质的方式。 AAT Bioquest的Amplite 比色α-酮戊二酸定量试剂盒提供灵敏的比色分析,用于定量生物样品中的α-酮戊二酸。它利用酶偶联反应释放过氧化氢,可通过Amplite Red在吸光度酶标仪中在570 nm处检测到。


适用仪器


光吸收酶标仪
吸收: 575nm
推荐孔板: 透明底板


产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品和连续稀释的α-酮戊二酸标准品(50μL)
2.加入等体积的α-酮戊二酸工作液(50μL)
3.在37°C孵育60-90分钟
4.监测570nm处的吸光度强度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液(200X):
将50μLDMSO(组分E)加入到Amplite TM Red(组分A)的小瓶中以制备200X储备溶液。

2.标准溶液

2.1α-酮戊二酸标准
将10μL10mMα-酮戊二酸标准品(组分D)加入990μLPBS中,得到100μMα-酮戊二酸标准溶液(AKG7)。 然后进行1:2连续稀释以获得连续稀释的α-酮戊二酸标准品(AKG6-AKG1)。

3.工作溶液

3.1将5 mL测定缓冲液(组分C)加入一个酶混合物1瓶(组分B1)中并充分混合。

3.2将100μLDdH2O加入一个酶混合物2小瓶(组分B2)中并充分混合。

3.3将整个小瓶(100μL)的酶混合物2和25μL的200X Amplite Red储备溶液转移到小瓶混合物1的小瓶中并充分混合以制备α-酮戊二酸的工作溶液。 注意:5mLα-酮戊二酸工作溶液足以容纳一个96孔板。 它不稳定,请及时使用。


样品分析

表1.在96孔透明底微孔板中的α-酮戊二酸标准品和测试样品的布局。 AKG =α-酮戊二酸标准品(AKG1-AKG7,1.563至100μM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
AKG1 AKG1 ... ...
AKG2 AKG2 ... ...
AKG3 AKG3
AKG4 AKG4
AKG5 AKG5
AKG6 AKG6
AKG7 AKG7

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AKG1-AKG7 50ul 连续稀释液(1.563至100μM)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备α-酮戊二酸标准品(AKG),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向α-酮戊二酸标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLα-酮戊二酸工作溶液,使总α-酮戊二酸测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLα-酮戊二酸工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在37℃孵育60-90分钟。

4.用吸光度板读数器监测吸光度的增加,在OD为570nm时进行路径检查。


参考文献

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Alpha-ketoglutarate reduces ethanol toxicity in Drosophila melanogaster by enhancing alcohol dehydrogenase activity and antioxidant capacity
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