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Buccutite FOL-Dye 650
物品单位 价格 品牌
2604 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:2 umoles
  • 货号:CS5372
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-25
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS5372
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 2 umoles
是否进口
简要概述

Buccutite FOL-Dye 650是美国AAT Bioquest生产的交联剂 ,我们的Buccutite 交联技术提供了最方便,最有效的交联方法,它以高共轭产率连接两种生物分子。我们的方法使用一对交联剂:Buccutite MTA和Buccutite FOL。MTA被添加到一个分子中,而FOL被添加到另一分子。交联反应是通过将Molecule-1-Buccutite MTA和Molecule-2-Buccutite FOL混合而引发的。该交联反应性能测试结果非常理想,它在极其温和和中性的条件下发生,不需要任何催化剂。此Buccutite FOL试剂用于确定Molecule-2-Buccutite FOL的FOL基团数量。



产品说明书

样品实验方案

溶液配制

储备溶液配制

Buccutite FOL-Dye 650储备溶液(10 mM):将200 uL DMSO添加到Buccutite FOL-Dye 650小瓶中以制备10 mM储备溶液。注意:Buccutite FOL-Dye 650储备溶液应在制备后储存在-20°C下,如果避免反复的冻融循环,则应稳定保存2个月。

 

实验步骤

FOL样品制备

  1. 使用100 ug FOL修饰的样品(例如:用FOL组修饰的抗体或其他蛋白质,分子量应高于15,000)。
  2. 用PBS将体积调节至100 uL。

运行FOL分析

  1. 将10 uL 10 mM Buccutite FOL-Dye 650储备溶液添加到FOL样品溶液中。
  2. 将反应混合物保持在室温下,旋转或摇动60分钟。
  3. 准备离心柱(Cat#CS60500 )进行样品纯化。
  4. 用干净的收集管将反应混合物上样至离心柱。将所有溶液加载到色谱柱后,在顶部添加10 uL PBS,然后以1,000 x g的速度离心色谱柱5分钟。
  5. 用收集管收集溶液。
  6. 用0.5 mL石英比色皿或Nanodrop测量吸收光谱。 注意:用PBS将洗脱液稀释5-10倍,测量800 nm至250 nm的吸收光谱,或仅读取280 nm和654 nm处的吸光度值。
  7. 使用以下公式计算FOL#(FOL摩尔数/分子摩尔数)。FOL#=(A654 / 250000)/ {(A280-0.09 X A654)/ EC}

A280:在280 nm处洗脱液的吸光度
A654:在654 nm处洗脱液的吸光度
EC:样品的消光系数(M -1 cm -1

 

数据分析

FOL计算:

样品:  GxM IgG-FOL,100μLPBS中的100 ug

用Nanodrop分光光度计测量吸光度:

A280 nm = 0.922,A654 nm = 2.270,CF280 = 0.09,654 nm时的
EC(Buccutite FOL-Dye 650)= 250,000 M -1 cm -1
280 nm IgG的IgG EC = 210,000 M -1 cm -1
FOL# (每摩尔IgG的FOL摩尔数)=(2.270 / 250000)/ {(0.922-0.09 X 2.270)/ 210000} = 2.6


 

图示

 

 

图1. Buccutite 交联技术提供了最方便,最有效的交联方法,以高共轭产率连接两个生物分子。我们的方法使用一对交联剂:Buccutite MTA和Buccutite FOL。MTA被添加到一个分子,而FOL被添加到另一分子。交联反应是通过将Molecule-1-Buccutite MTA和Molecule-2-Buccutite FOL混合而引发的。该交联反应在极其温和和中性的条件下发生,不需要任何催化剂。


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