15926423062  

产品展厅

iFluor 780 马来酰亚胺
物品单位 价格 品牌
3924 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 mg
  • 货号:CS1372
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-29
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS1372
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 mg
是否进口
简要概述

AAT Bioquest 的 iFluor 染料针对标记蛋白质,尤其是抗体进行了优化。这些染料明亮、耐光,对蛋白质的淬灭作用最小。它们可以被荧光仪器的主要激光线(例如 350、355、405、488、555、633、638、647、660 和 802 nm)很好地激发。 iFluor 780 染料的荧光激发和发射最大值分别为 ~780 nm 和 ~800 nm。这些光谱特性使它们成为荧光成像和流式细胞术应用的独特颜色。 iFluor 780 是一种出色的受体染料,可用于制备与 APC 和 PE 的串联颜色。iFluor 780 是最亮的 NIR 染料之一,它的一些抗体偶联物比由类似波长的 IRDyes 制备的抗体(如 IRDye800 CW)明显更亮。 iFluor 780 马来酰亚胺是硫醇反应形式,可用于与含硫醇的分子偶联,如还原抗体、硫醇修饰的寡核苷酸和肽。


产品说明书

染色样本分析

操作步骤

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100μL反应缓冲液(如1 M碳酸钠溶液或1 M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900μL目标蛋白溶液(如抗体,蛋白质浓度> 2 mg / ml,如果可能)混合至100μL给予1 mL蛋白质标记原液。

注1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去广泛用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注3:不纯的抗体、稳定的牛血清蛋白(BSA)抗体或明胶不会被很好的标记。叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得极佳标记结果。

注4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率会显着降低。为获得极佳标记效率,建议极终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到iFluor 染料SE小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合前准备染料储备溶液(溶液B)。及时使用。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可在冰箱中保存两周,避光保存。 避免冻融循环。

 

3.确定极佳染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能不利地影响其结合亲和力,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定极佳染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 - 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起始点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中。蛋白质溶液(95μl溶液A)有效摇动。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2运行缀合反应(参见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比(DOS)(见说明书)。

3.6运行上述4种结合物的功能测试,确定极佳的染料/蛋白质比例,以扩大标记反应。

 

4.运行结合反应:

4.1有效加入适量的染料储备溶液(溶液B)到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中晃动。

注意:溶液B /溶液的极佳摩尔比由步骤3.6确定。如果跳过步骤3,我们建议使用10:1溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)的摩尔比。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 - 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接从步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时立即加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4向所需样品中加入更多PBS(pH 7.2-7.4)以完成色谱柱纯化。 合并含有所需染料 - 蛋白质缀合物的级分。

注1:立即使用时,染料 - 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注2:对于长期储存,染料 - 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥

 

参考文献

Fluorescently Labeled Cetuximab-IRDye800 for Guided Surgical Excision of Ameloblastoma: A Proof of Principle Study.
Authors: Morlandt, Anthony B and Moore, Lindsay S and Johnson, Aubrey O and Smith, Caris M and Stevens, Todd M and Warram, Jason M and MacDougall, Mary and Rosenthal, Eben L and Amm, Hope M
Journal: Journal of oral and maxillofacial surgery : official journal of the American Association of Oral and Maxillofacial Surgeons (2020): 1736-1747

Characterization and Predictive Value of Near Infrared 2-Deoxyglucose Optical Imaging in Severe Acute Pancreatitis.
Authors: de Oliveira, Cristiane and Patel, Krutika and Mishra, Vivek and Trivedi, Ram N and Noel, Pawan and Singh, Abhilasha and Yaron, Jordan R and Singh, Vijay P
Journal: PloS one (2016): e0149073

Evaluation of near infrared fluorescent labeling of monoclonal antibodies as a tool for tissue distribution.
Authors: Conner, Kip P and Rock, Brooke M and Kwon, Gayle K and Balthasar, Joseph P and Abuqayyas, Lubna and Wienkers, Larry C and Rock, Dan A
Journal: Drug metabolism and disposition: the biological fate of chemicals (2014): 1906-13

Synthesis and biological evaluation of panitumumab-IRDye800 conjugate as a fluorescence imaging probe for EGFR-expressing cancers.
Authors: Bhattacharyya, Sibaprasad and Patel, Nimit and Wei, Ling and Riffle, Lisa A and Kalen, Joseph D and Hill, G Craig and Jacobs, Paula M and Zinn, Kurt R and Rosenthal, Eben
Journal: MedChemComm (2014): 1337-1346

Identification of forensic samples by using an infrared-based automatic DNA sequencer.
Authors: Ricci, Ugo and Sani, Ilaria and Klintschar, Michael and Cerri, Nicoletta and De Ferrari, Francesco and Giovannucci Uzielli, Maria Luisa
Journal: Croatian medical journal (2003): 299-305

< 返回前一个页面 >





联系方式
手机:15926423062
电话:15926423062
手机访问官网

15926423062

武汉科斯坦生物科技有限公司 版权所有(C)2022  XML 技术支持: 食品商务网   盖德化工网  

武汉科斯坦生物科技有限公司