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吲哚菁绿ICG-ATT
物品单位 价格 品牌
5244 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 mg
  • 货号:CS181
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-03-31
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS181
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 mg
是否进口
简要概述

吲哚菁绿(ICG)是一种用于医学诊断的花青染料。它用于确定心输出量,肝功能和肝血流量,以及用于眼科血管造影。它具有接近800nm的峰值光谱吸收。这些红外线能穿透视网膜层,使ICG血管造影成像比荧光血管造影更深的循环模式。ICG的半衰期为150至180秒,仅通过肝脏从胆汁液中排出。最近的一项研究表明ICG在注射后20分钟内靶向动脉粥样硬化,并提供足够的信号增强,用于动脉粥样硬化兔子体内的脂质,发炎,冠状动脉大小的斑块的检测。离体荧光反射成像显示,与注射生理盐水的动脉粥样硬化兔相比,注射ICG的动脉粥样硬化兔的斑块靶 - 背景比高。氨基反应性ICG衍生物用于与抗体和其他生物分子制备ICG生物缀合物。所有ICG染料都需要溶解在DMSO中。


产品说明书

样本标记分析

注意:该标记方案是针对山羊抗小鼠IgG与ICG的缀合物开发的。

 

1.准备蛋白质储备溶液(溶液A):

将100L反应缓冲液(例如,1M碳酸钠溶液或1M磷酸盐缓冲液,pH~9.0)与900L目标蛋白质溶液(例如抗体,蛋白质浓度> 2mg / ml,)混合,得到1 mL蛋白标记储备液。

注意1:蛋白质溶液(溶液A)的pH值应为8.5±0.5。 如果蛋白质溶液的pH低于8.0,则需使用1M碳酸氢钠溶液或1M pH 9.0磷酸盐缓冲液将pH调节至8.0-9.0的范围。

注意2:蛋白质应溶解于pH7.2-7.4的1X磷酸盐缓冲盐水(PBS)中。如果蛋白质溶解在Tris或甘氨酸缓冲液中,则必须用pH7.2-7.4的1X PBS透析,以除去用于蛋白质沉淀的游离胺或铵盐(例如硫酸铵和乙酸铵)。

注意3:牛血清白蛋白(BSA)、明胶稳定不纯的抗体等标记的效果不理想。 叠氮化钠或硫柳汞的存在也可能干扰缀合反应。 可以通过透析或旋转柱除去叠氮化钠或硫柳汞,以获得最佳标记结果。

注意4:如果蛋白质浓度低于2 mg / mL,则结合效率明显降低。 为获得最佳标记效率,建议最终蛋白质浓度范围为2-10 mg / mL。

 

2.准备染料储备溶液(溶液B):

将无水DMSO加入到ICG染料小瓶中以制备10-20mM储备溶液。 通过移液或涡旋混合均匀。

注意:在开始缀合之前准备染料储备溶液(溶液B),现配现用,保持溶液新鲜。 染料储备溶液的长期储存可降低染料活性。 溶液B可以在不受光照和潮湿的情况下储存在冰箱中两周。 避免冻融循环。

 

3.确定最佳染料/蛋白质比例(可选):

注意:每种蛋白质都需要不同的染料/蛋白质比例,这也取决于染料的性质。蛋白质的过度标记可能对其结合亲和力产生不利影响,而低染料/蛋白质比率的蛋白质缀合物会降低灵敏度。我们建议您通过使用连续不同量的标记染料溶液重复步骤4和5来实验确定最佳染料/蛋白质比率。通常,对于大多数染料 - 蛋白质缀合物,推荐使用4-6种染料/蛋白质。

3.1使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)作为起点:将5μl染料储备溶液(溶液B,假设染料储备溶液为10 mM)加入到样品瓶中,蛋白质溶液(95μl溶液A)。假设蛋白质浓度为10mg / mL并且蛋白质的分子量为~200KD,蛋白质的浓度为~0.05mM。

注意:蛋白质溶液中DMSO的浓度应<10%。

3.2运行结合反应(见下面的步骤4)。

3.3重复#3.2,溶液B /溶液A的摩尔比为5:1;分别为15:1和20:1。

3.4使用预制的旋转柱纯化所需的缀合物。

3.5计算上述4种结合物的染料/蛋白质比例(DOS)。

3.6运行上述4种缀合物的功能检测,确定最佳的染料/蛋白质比例,以扩大标记反应。

 

4.运行缀合反应:

4.1在有效摇动下,将适量的染料储备溶液(溶液B)加入到蛋白质溶液(溶液A)的小瓶中。

注意:溶液B /溶液的最佳摩尔比由步骤3.6确定。 如果跳过步骤3,我们建议使用10:1摩尔比的溶液B(染料)/溶液A(蛋白质)。

4.2继续在室温下旋转或摇动反应混合物30-60分钟。

 

5.纯化缀合物

以下方案是使用Sephadex G-25柱纯化染料 - 蛋白质缀合物的实例。

5.1按照制造说明准备Sephadex G-25色谱柱。

5.2将反应混合物(直接来自步骤4)加载到Sephadex G-25柱的顶部。

5.3样品在顶部树脂表面下方运行时,加入PBS(pH 7.2-7.4)。

5.4将更多PBS(pH 7.2-7.4)加入所需样品中以完成柱纯化。 

注意1:对于立即使用时,染料 - 蛋白质偶联物需要用染色缓冲液稀释,并等分多次使用。

注意2:对于长期储存,染料 - 蛋白质缀合物溶液需要浓缩或冷冻干燥。

 

参考文献

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