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Cy3,炔烃
物品单位 价格 品牌
1272 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 mg
  • 货号:CS144
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-04-01
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS144
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 mg
是否进口
简要概述

Cy3 炔烃是美国AAT Bioquest生产的荧光染料 ,各种花青3(Cy3)染料已用于标记生物分子,用于荧光成像和其他基于荧光的生化分析。它们广泛用于标记肽,蛋白质和寡核苷酸等。Cy3染料在与蛋白质结合后荧光大幅度增加。Cy3炔烃选择性地与叠氮基团反应。



产品说明书

操作方案

标记寡核苷酸

1.准备以下试剂:

200mMTHPTA [tris(3-羟丙基三唑基甲基)胺]水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃修饰的低聚水溶液(尽可能浓缩,例如>10 mg / mL)

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(有关推荐的溶剂,请参阅我们的网站)

2.在反应前将CuSO4与THPTA以1:2的比例混合并充分涡旋几分钟。该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃改性的低聚物溶液中加入过量的染料叠氮化物(摩尔比为2-5当量)。

4.加入5当量的THPTA / CuSO4工作溶液(来自步骤1)。

5.加入10-30当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌,涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.沉淀或纯化寡聚物。

 

标记肽

1.准备以下试剂:

200 mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃修饰肽水溶液或DMF溶液(取决于您的肽溶解度,如果可能,> 10 mg / mL)

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(有关推荐的溶剂,请参阅我们的网站)

2.在反应前几分钟以1:2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃修饰的肽溶液中加入过量的染料叠氮化物(摩尔比为5-10当量)。

4.加入5-10当量的THPTA / CuSO4

5.加入10-20当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌,涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过HPLC纯化您想要的肽。

 

标记炔烃有机小分子

1.准备以下试剂:

200 mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃化合物水溶液或DMF溶液(取决于您的化合物溶解度,如果可能,> 10mg / mL,)

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(有关推荐的溶剂,请参阅我们的网站)。

2.在反应前几分钟以1:2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。当冷冻时,该溶液可稳定数周。

3.向炔烃溶液中加入过量的染料叠氮化物(摩尔比为5-10当量)。

4.加入25当量的THPTA / CuSO4

5.加入50当量的抗坏血酸钠。

6.在室温下搅拌反应混合物30-60分钟。

7.通过色谱或其他方法纯化您想要的分子。

 

标记生物聚合物

1.准备以下试剂:

200 mM THPTA配体水溶液

100mM CuSO4水溶液

炔烃改性的水中生物聚合物(尽可能浓缩,例如> 5毫克/毫升)

100 mM抗坏血酸钠水溶液

10 mM染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(有关推荐的溶剂,请参阅我们的网站)。

2.在反应前几分钟以1:2的比例孵育CuSO4与THPTA配体。 该溶液在冷冻时可稳定数周。

3.向炔烃改性的生物聚合物溶液中加入过量的染料叠氮化物(负载比:5-20染料叠氮化物/炔烃)。

4.加入5摩尔当量(参考染料叠氮化物)的THPTA / CuSO4

5.加入10当量的抗坏血酸钠(参见染料叠氮化物)。

6.在室温下搅拌,涡旋或摇动反应混合物30-60分钟。

7.通过凝胶过滤或透析纯化您想要的分子。

 

标记细胞,细胞裂解物或生物样品

1.准备以下试剂:

100mM THPTA配体水溶液

20mM CuSO4水溶液

300mM抗坏血酸钠水溶液

2.5mM炔烃或叠氮化物标记试剂水溶液或DMSO溶液

2.对于每个叠氮化物或炔烃修饰的细胞或细胞裂解物样品,将以下试剂加入1.5 mL微量离心管中,然后短暂涡旋混合。

50μL细胞或细胞裂解液样品

50μLPBS缓冲液

50μL5mM相应的染料叠氮化物水溶液或DMSO溶液(或染料炔烃)检测试剂

3.加入10μL100mM THPTA溶液,短暂涡旋混合。

4.加入10μL20mM CuSO4溶液,短暂涡旋振荡。

5.加入10μL300mM抗坏血酸钠溶液以引发点击反应,短暂涡旋混合。

6.保护点击反应不受光照,使其在室温下孵育30分钟。

7.点击标记细胞或细胞裂解物并准备用于下游处理和分析。

 

参考文献

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