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Mca-APK(Dnp)ACE2荧光底物
物品单位 价格 品牌
2472 AAT Bioquest
  • 产地:American
  • 型号:1 mg
  • 货号:CS13555
  • 发布日期: 2022-03-01
  • 更新日期: 2022-04-01
产品详细说明
产地 American
品牌 AAT Bioquest
货号 CS13555
用途范围 Research Grade
纯度 98%%
CAS编号
规格 1 mg
是否进口
简要概述

ACE2(血'管紧张素转换酶2)是一种金属蛋白酶,需要将二价阳离子置于活性位点才能进行催化。它具有围绕其三价功能的多种生理作用:肾素-血'管紧张素系统的负调节剂,氨基酸转运的促进剂以及严重的急性呼'吸系'统综合症'冠'状'病'毒(SARS-CoV)和S'A'RS-C'oV-2受体。ACE2最近被确定为S'ARS-CoV-2受体,是冠’状'病'毒疾病的传染源,在免疫,炎'症,ACE2和心'血'管疾'病之间提供了关键的联系。尽管与SARS-CoV具有密切的进化关系,但SA'RS-CoV-2的受体结合域在几个关键氨基酸残基上有所不同,从而与人ACE2受体具有更强的结合亲和力,这可能是SA'RS-CoV-2致病性更大的原因。由S'ARS-CoV-2结合后,ACE2功能的丧失是由内吞作用以及蛋白水解切割和加工的激活驱动的。ACE2系统是防止心'力'衰'竭(包括心'肌'梗'塞和高'血'压)以及肺部疾病和糖'尿'病的重要保护途径。ACE2控制肠营'养不'良和血'管通透性已成为肺'动'脉'高'压和糖'尿'病性心血'管并'发'症的重要机制。Mca-APK(Dnp)ACE2底物是一种FRET肽,用于测量细胞和组织中的酶活性。它使用DNP作为淬灭剂分子来淬灭甲氧基香豆素(Mca)的荧光。当酶切割脯氨酸-赖氨酸残基并恢复Mca的荧光时,这种相互作用被消除。这种荧光底物比常用的基于HPLC分离的方法具有更大的灵活性和更高的通量。



产品说明书

样品分析方案

简要概述

准备测试样品和空白样品(50 μL)

根据需要用抑制剂处理样品

加入Mca-APK(Dnp)ACE2底物工作溶液(50 μL)

在37°C下孵育样品

在Ex / Em = 320/430 nm(截止= 420 nm)下检测荧光


储备溶液配制

Mca-APK(Dnp)ACE2底物原液
用适量的DMSO准备5-10 mM的储备溶液。
注意:将溶液分装后在-20°C下,避光保存。
工作溶液配制
Mca-APK(Dnp)ACE2底物工作溶液
在1 mL分析缓冲液中加入5 μL Mca-APK(Dnp)ACE2底物储备液(10 mM),制成Mca-APK(Dnp)ACE2底物工作液。
注意:应根据经验测量底物的适当浓度。
注意:最终浓度为50 μM。
注意:100 mM含1 M NaCl,pH约7.5的Tris-HCl可用作检测缓冲液。也可以将600 μM的ZnCl2添加到缓冲液中。


操作步骤

以下方案可用作参考。
  1. 准备并添加50 μL测试样品和空白对照。
  2. 向样品和空白样品中加入50 μL Mca-APK(Dnp)ACE2底物工作溶液。
  3. 在37°C下孵育样品。
  4. 用荧光酶标仪在Ex / Em = 320/430 nm(截止= 420 nm)下检测荧光增加。

对于动力学读数:立即开始连续不断地测量荧光强度,并每5分钟记录一次数据,持续30-120分钟。
对于终点读数:在避光的条件下,将反应在所需温度下孵育30至120分钟。然后检测荧光强度


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