15926423062  

产品展厅

T4 DNA Ligase
物品单位 价格 品牌
160 Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:40KU
  • 货号:CSCE1106
  • 发布日期: 2022-05-09
  • 更新日期: 2022-05-10
产品详细说明
产地 China
品牌 Chemstan
货号 CSCE1106
用途范围 Research Grade
纯度 >95% as determined by SDS-PAGE%
CAS编号
规格 40KU
是否进口

产品概述

T4 DNA Ligase可催化dsDNA平末端或粘性末端相邻核酸的5'磷酸末端和3'羟基末端形成磷酸二酯键,还可催化RNA和双链中的ssDNARNA链连接,但不能催化全单链核苷酸连接。适用于标记RNA 3'-末端,环化RNADNA寡聚核苷酸以及克隆cDNA等核酸操作。

产品组分

CE1106 (40,000 U)

T4 DNA Ligase (400 U/μl) 100 μl

保存条件

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。

适用范围

1. DNA-片段和载体DNA的连接。

2. DNA-片段和LinkerAdaptor DNA的连接。

单位定义

20 μl的连接反应体系中,6 μgλDNA-HindⅢ的分解物在16℃下反应30 min时,有50%以上的DNA-片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)

反应过程

1在微量离心管中制配制连接反应体系:

灭菌蒸馏水 To 10 μl

10 × Ligase Buffer                      1 μl

插入片段a 0.3 pmol

载体DNAb 0.03 pmol

T4 DNA Ligase (400 U/μl) 1 μl

a:插入片段与载体的摩尔比应在3:1 - 10:1之间。

B:平末端载体与DNA-片段进行连接时,应首先将载体进行去磷酸化处理,以防止其自身环化。

216℃过夜反应

3、连接产物转化

在冰上解冻克隆用的化学感受态细胞(如:DH5α Competent cell)

10 μl连接产物加入到100 μl感受态细胞中,轻弹管壁混匀(请勿振荡混匀),冰上静置30 min

连接产物转化体积最多不应超过所用感受态细胞体积的1/10

③ 42℃水浴热激45 sec后,立即置于冰上冷却2 - 3 min

加入900 μl SOCLB培养基(不添加抗生素)37℃摇菌1 h(200 - 250 rpm)

将相应抗性的LB平板固体培养基在37℃培养箱中预热。

⑥ 5,000 rpm(2,400 × g)离心5 min,弃掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬,用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。

⑦ 37℃培养箱中倒置培养12 - 16 h

< 返回前一个页面 >





联系方式
手机:15926423062
电话:15926423062
手机访问官网

15926423062

武汉科斯坦生物科技有限公司 版权所有(C)2022  XML 技术支持: 食品商务网   盖德化工网  

武汉科斯坦生物科技有限公司