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E. coli DNA Ligase
物品单位 价格 品牌
600 Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:200U
  • 货号:CSCE1107
  • 发布日期: 2022-05-09
  • 更新日期: 2022-05-11
产品详细说明
产地 China
品牌 Chemstan
货号 CSCE1107
用途范围 Research Grade
纯度 >95% as determined by SDS-PAGE%
CAS编号
规格 200U
是否进口

产品概述


E.coli DNA Ligase是以NAD+为辅助因子的酶,可催化双链DNA互补的3'-羟基和5'-磷酸末端之间形成磷酸二酯键,最适用于粘性末端的双
链DNA的连接,但不能有效连接平末端底物。该酶可以热灭活,在一定温度范围内 (4℃ - 37℃) 都有活性。
保存条件
-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。
适用范围
1. 双链DNA的分子粘性末端克隆。
2. 平末端连接,需要有10%-15%PEG和高浓度的一价阳离子的存在。
3.cDNA第二条链合成产物的cDNA克隆。
单位定义
一个单位的DNA连接酶被定义为在标准条件下,16℃ 30分钟内连接hindⅢ消化的λ噬菌体DNA(5'末端的DNA为0.12μM,300μg/ ml的浓

度)(> 50%)所需要的酶量。


反应过程
将最终浓度为0.12 μM的DNA与适量单位的E.coli DNA ligase在20-50μL1X E. coli DNA Ligase Buffer中16℃孵育过夜。
热灭活条件
65℃加热20分钟。
质量控制
1.核酸外切酶活性:未检测出污染DNA外切和内切核酸酶,核糖核酸酶活性。
2.活性检测:将20U的E.coli DNA ligase与1μg经HindIII消化过的DNA在50 μL 1X E.coli DNA Ligase Buffer中37℃孵育16小时,在琼脂糖
凝胶上形成正常且清晰的条带。
注意事项
1. 需要NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)作为辅助因子,与使用rATP的其他连接酶不同。
2. 平末端片段的连接效率极低。对于平末端片段的连接,使用T4 DNA Ligase。
3. 不能将RNA连接到DNA。
4. 该酶只连接具有粘性末端的DNA-片段。



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