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TRIpure Reagent(Trizol总RNA提取试剂)
物品单位 价格 品牌
350 Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:100 mL
  • 货号:CSRE0101
  • 发布日期: 2022-05-11
  • 更新日期: 2022-05-12
产品详细说明
产地 China
品牌 Chemstan
货号 CSRE0101
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 100 mL
是否进口

储存


4℃避光
储存事项

TRIpure 在室温下能稳定保存 12 个月。尽管如此,为达到最佳效果,我们建议保存在 2~8°C 的环境下。


重要提示
本品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品,如防护服装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触,应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。
产品介绍

TRIpure 是广谱型总 RNA 提取试剂。实验操作快速方便,颜色鲜明,便于分层。本试剂适用范围广泛,可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总 RNA。该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在 TRIpure 中被充分裂解的同时能够最大限度地保证 RNA 的完整性。在加入氯仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层红色有机相,RNA 分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总 RNA。提取的总 RNA 完整性好,无蛋白和 DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如 RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northernblot、Dot Blot、体外翻译等。

TRIpure 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种 RNA 的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的 RNA 琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于 7kb 和15 kb 之间不连续的高分子量条带(mRNA 和 hnRNA 成分),两条优势核糖体~5kb(28S)和~2 kb(18S),低分子量 RNA 介于 0.1 和 0.3 kb 之间 (tRNA, 5S)。当抽提的 RNA 用 TE 稀释时其 A260/A280 比值≥1.8。注意如果是普通琼脂糖凝胶电泳,28S 的位置大约在 2kb,18S 大约在 1kb 的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大。


注意事项


1.样品用 TRIpure 匀浆后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C 下可放置一个月以上。保存在 75%乙醇中的 RNA 沉淀,2-8°C 可以保存一周,-20°C 条件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比较短,容易降解,建议提取后尽快进行后续实验,如反转录成 cDNA,Northern Blot 等。

2.若下游实验对 DNA 非常敏感,建议用 RNase free DNase I 对 RNA 进行处理。

3.自备试剂:氯仿、异丙醇(新开封或提取 RNA 专用)、75%乙醇(用 DEPC 处理过的水配制)、 RNase free water 或者 DEPC 处理过的水。

本公司生产 TRIpure Reagent 质量优异,可以完美替代 Invitrogen 的 TrizolReagent。

RNA 抽提操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)

提示:用 TRIpure 抽提 RNA 时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明,所有的操作应该在在 15~30°C的室温条件下。


1.匀浆

a. 植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIpure 中迅速研磨,每50-100mg组织加入1mL TRIpure,混匀。注意:样品体积一般不要超过 TRIpure 体积的10%。
b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎,每30-100mg组织加入1mL
c. TRIpure,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入 TRIpure 1mL混匀。
注意:样品体积一般不要超过 TRIpure 体积的10%。
d. 单层培养细胞:尽量去除干净残留培养液后直接往直径3.5 cm的培养板中加入1mL 的 TRIpure 覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的 TRIpure 量(每10cm2加1mL)。当 TRIpure 量不足时可导致抽提的RNA中污染有DNA。
注意:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出全部RNA,继续做即可。
e. 细胞悬液: 离心收集细胞。 在 TRIpure 试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106的动物细胞,植物或酵母菌细胞或每1×107细菌加 1mL 的TRIpure。在加入 TRIpure 前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
f. 血液:推荐使用本公司的全血或者液体样品专用的 TRIpure Reagent。
2.将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置 5 分钟以使核蛋白体完全解离。
3.可选步骤:在 4°C 的条件下以 12,000 rpm 的离心力离心 10 分钟,取上清。如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量 DNA,上清中含有 RNA。处理脂肪组织的样品时,上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。
4.每 1mL TRIpure 加 0.2mL 氯仿。盖紧管盖,剧烈震荡 15 秒并将其在室温下放置2~3 分钟。
5.在 4°C 12,000 rpm 的离心力高速冷冻离心 10-15 分钟。离心后混合物分成三层:下层红色有机苯酚氯仿层,中间层,上层无色的水样层。RNA 无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加 TRIpure 容量的 50-60%。(有机层和中间层是蛋白和 DNA,如果需要提取,请联系索取提取方法)。
6.将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇。 颠倒混匀后室温放置10 分钟。RNA 沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
7.在室温或者 4°C 12,000 rpm 离心 10 分钟,弃上清。
8.加入 75%乙醇洗涤沉淀。每使用 1mL TRIpure 用 1mL 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
9.在室温或者 4°C 12,000 rpm 离心 3 分钟,弃上清,注意不要丢失 RNA 沉淀。注意:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
10. 室温放置 2-3 分钟,晾干。加入 30-100μL RNase free water,充分溶解 RNA,得到的 RNA 保存在-70℃,防止降解。
注意:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解






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