1. 适用范围：
适用于快速提取植物组织细胞总RNA，采用基因组DNA清除柱技术可有效清除电泳可见gDNA残留，所提取的RNA可用于反转录PCR，荧光定量PCR等实验。
2. 试剂盒稳定性、储存：
本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
储存事项：
1). 不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃-25℃）进行。
2). 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH 值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3. 产品介绍：
本公司在无苯酚、氯仿 RNA 快速提取技术基础上，又独家研发成功基因组 DNA 清除柱技术可以有效清除 gDNA 残留，得到的 RNA 一般不需要 DNase 消化，可用于反转录 PCR、荧光定量 PCR 等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶，离心沉淀去除多多酚和次级代谢产物，然后裂解混合物用乙醇调节 RNA 结合吸附到基因组 DNA 清除柱，然后 RNA 被选择性洗脱滤过，吸附在基因组 DNA 清除柱上的残留 DNA 无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清除掉 DNA。滤过的 RNA 用乙醇调节结合条件后，RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的 RNase free H2O 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。
4.产品特点：
1). 完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2). 简捷，单个样品操作一般可在 25 分钟内完成。
3). 独家研发成功基因组 DNA 清除柱技术可以有效清除 gDNA 残留，得到的 RNA 一般不需要 DNase 消化，可用于反转录 PCR、荧光定量 PCR 等实验。
4). 适应性极其广泛，可以提取包括复杂中草药如石斛/丹参/雪莲/人参、复杂淀粉种子如水稻/小麦/玉米种子、复杂果实如葡萄/蓝莓/草莓/西瓜果实、复杂抗逆植物如冬青/松针/沙棘/胡杨、复杂花卉月季/玫瑰/梅/牡丹花、复杂多糖植物紫菜/仙人掌/芦荟/百合鳞茎/水稻种子等数百种样品。
5). 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 2.1～2.2，基本无 DNA 残留，可用于 RT-PCR，Northern-blot，二代测序和各种实验。
5.注意事项
1). 所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2). 需要自备β-巯基乙醇，乙醇，研钵(可选)。
3). 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
4). 裂解液CLB、RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或生理盐水冲洗。
5). 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase消化也无法做到 100%无残留），本公司 RNA 提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组 DNA 清除柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1). 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2). 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3). 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。
4). 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。
6.操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
第一次使用前请先在漂洗液 RW 瓶中加入指-定量无水乙醇!
取 1ml 裂解液 CLB 至离心管内(如果 CLB 有析出或者沉淀需先置于 65℃水浴重新溶解），在裂解液 CLB 中加入 5% β-巯基乙醇（1ml CLB 加 50μl β-巯基乙醇）。颠倒混匀后 65℃水浴中预热。多个样品按照比例放大准备。
1). 直接研磨法（实验室无液氮情况下或者柔软易研磨植物样品推荐此法）:
a. 新鲜植物组织或者冰冻保存样品称重后取 100mg-200mg（水分少的样品如叶片种子等可加 100mg-150mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些）迅速剪成小块放入研钵，加入 1ml CLB（已加有 β-巯基乙醇）室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液 CLB 立刻充分接触以抑制 RNA 酶活性。β-巯基乙醇是裂解液 CLB 的关键成分，必要的时候可以提高终浓度到 10-20%。如果特别复杂植物，可以尝试在裂解液中加入 PVP40 至终浓度 2%。
b. 将裂解物转入离心管，立即剧烈振荡 15 秒，短时放回 65℃水浴中（5-10 min），中间偶尔颠倒 1-2 次帮助裂解。13,000rpm 离心 10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。
c. 取裂解物上清（在不超过基因组 DNA 清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。
d. 立刻按操作步骤的步骤 3）。
2). 液氮研磨法（适用广泛，提取复杂难破碎，易降解样品时推荐此法）:
a. 液氮中研磨新鲜或-70℃冷冻的材料至细粉。
b. 转移 100mg-200mg 细粉（水分少的样品如叶片种子等可加 100mg-150mg，水分多的样品如草莓西瓜果实可多加一些）加至预热的裂解液 CLB（已加有 β-巯基乙醇）离心管中。立即剧烈涡旋 30-60 秒或者用吸头吹打混匀裂解直得到满意匀浆结果(或者电动匀浆 30 秒)，可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高产量。
c. 短时放回 65℃水浴中（5-10 min），中间偶尔颠倒 1-2 次帮助裂解。
d. 将裂解物 13,000 rpm 离心 10 分钟，沉淀不能裂解的碎片。
e. 取裂解物上清（在不超过基因组 DNA 清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。若上清表面有漂浮物，用吸头挑开吸取下面液体即可。
f. 立刻按操作步骤的步骤 3）。
3). 将混合物(每次小于 720μl，多可以分两次加入)加入一个基因组清除柱中，（清除柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 2 分钟，弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。
4). 将基因组 DNA 清除柱子放在一个干净 2ml 离心管内（不用 RNAse free 或者 DEPC 处理，一般干净的新离心管即可。也可使用 RNA 吸附柱配套的新的干净收集管），在基因组清除柱内加 500μl 裂解液 RLT Plus，13,000 rpm 离心 30 秒， 收集滤液（RNA 在滤液中），用微量移液器较精确估计滤过液体积（通常为 450-500μl 左右，滤过时候损失体积应该减去），加入 0.5 倍体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
5). 立刻将混合物(每次小于 720μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 2 分钟，弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。
6). 加 700μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 分钟，13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
7). 加入 500μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。加入 500μl 漂洗液 RW，重复一遍。
8). 将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9). 取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中间部位加 30-50μl RNase free water（事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。
10). 如果预期 RNA 产量>30μg，加 30-50μl RNase free water 重复步骤 9，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液重新加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要 RNA 浓度高)。洗脱两遍的 RNA 洗脱液浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的 RNA 产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。
