2.稳定性
本试剂盒在室温储存 9 个月不影响使用效果。
3. 注意事项
1).Bead Tube 中添加 Sodium Phosphate Buffer 和 MT Buffer 后,应留出足够的空间,以便进行有效的 FastPrep®仪器等研磨仪的处理。建议使用 500 mg 的样本材料,且保障 Bead Tube 中有 250-500μL的剩余空间。
2).避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、 pH 值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
3).为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4).本产品仅作科研用途!
4. 使用前准备:
1).自备设备和试剂:台式离心机(≥12,000 rpm 转速)、研磨仪、水浴锅或金属浴,无水乙醇,离心管等。
2).所有的离心步骤均在室温完成。
3).首次使用前,须在 PQ Solution 瓶中加入 2 倍体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。
4).首次使用前,须在 Buffer WB 瓶中加入 4 倍体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。
5. 操作步骤:(实验前请先阅读注意事项)
提示:
※第一次使用前请先在 PQ Solution 和 Buffer WB 瓶中加入指-定量无水乙醇!
一、样本预处理:
1.取 500 mg 土壤样本至 Bead Tube 中。
2.加入 980 μL Sodium Phosphate Buffer 至 Bead Tube 中,轻柔涡旋混匀。
3.加入 120 μL MT Buffer。
【注】:MT Buffer 易形成沉淀,若出现沉淀,使用前,60℃水浴复溶。
4.将 Bead Tube 置于研磨仪中,40 Hz 处理 40 sec。亦可使用 FastPrep®
Instrument,速度设置 6.0 匀浆 40 sec。
5.12000 rpm 离心 5 min,沉淀碎片颗粒。
6.转移上清液至另一干净的 2 mL 离心管中。加入 250 μL PPS Solution,
手动晃动 10 次混匀。然后 4℃放置 5 min。
7.12000 rpm 室温离心 3 min,之后取不多于 900 μL 上清液,转移至另
一干净的 2 mL 离心管中。
8.加入 1/3 体积的 IRS Solution(如上清液为 900 μL,则添加 300 μL IRS
Solution),轻柔涡旋混匀。4℃放置 5 min。
9.12000 rpm 室温离心 1 min。转移上清液至 5 mL 离心管中。
10.加入 1.5 倍体积的缓冲液 PQ Solution,立即吹打混匀。
【注】:出现沉淀对后续操作无影响。
【注】:吸取上清液,应避免吸到沉淀,否则会堵塞吸附柱,并影响产物纯度。
【注】:请务必将 PQ Solution 直接加入上清液中并立即混匀。
二、 DNA 提取:
1.将 DNA Bind Column 套入 2 mL 收集管中,备用。
2.将预处理混合液加入到 DNA Bind Column 中,12,000 rpm 室温离心 1
min,弃掉废液。
【注】:混合液每次最大加入体积 700 μL,可分多次离心。
【注】:离心后,若滤膜仍有液体残留,可延长离心时间至 5 min。
3.将 DNA 吸附柱放回收集管中,加入 600 μL Buffer WB,12,000 rpm 室
温离心 30 sec,弃废液。
【注】:确保 Buffer WB 已添加无水乙醇。
4.重复一遍步骤 3。
5.将 DNA Bind Column 放回收集管中,空柱 12,000 rpm 室温离心 2 min,以除去残留的 Buffer WB。
6. 将 DNA Bind Column 放入新的洁净 1.5 mL 离心管中,在滤膜中央加入 30-100 μL 的 Elution Buffer,室温放置 3 min。然后 12,000 rpm 离心 1 min,收集滤液即为样本 DNA。
【注】:可通过以下方式提高回收产量:65℃预热洗脱液;将滤液再次上柱,
室温放置 3 min,洗脱。
【注】使用较小体积(至少 30μl)的 Elution Buffer 将获得更高的浓度。
7.样品 DNA 可置于-20℃短期保存,-80℃长期保存。