本公司在无苯酚、氯仿 RNA 快速提取技术基础上，又独家研发成功基因组DNA 清除柱技术可以有效清除gDNA 残留，得到的RNA 一般不需要DNase 消化，可用于反转录PCR、荧光定量 PCR 等实验。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞 RNA 酶，植物RNA 助提剂 PLANTaid 帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后裂解混合物用乙醇调节 RNA 结合吸附到基因组 DNA 清除柱，然后 RNA 被选择性洗脱滤过，吸附在基因组 DNA 清除柱上的残留 DNA 无法洗脱连同柱子一起丢弃从而清除掉DNA。滤过的RNA 用乙醇调节结合条件后，RNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的 RNase free H2O 将纯净 RNA 从硅基质膜上洗脱。
4. 产品特点：
1). 完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2). 简捷，单个样品操作一般可在 25 分钟内完成，世界上最简单快速的试剂盒。
3). 独有的植物RNA 助提剂 PlantAid 可以有效结合多糖多酚，提高清除效果。
4). 独家研发成功基因组DNA 清除柱技术可以有效清除 gDNA 残留，得到的 RNA 一般不需要DNase 消化，可用于反转录 PCR、荧光定量PCR 等实验。
5). 适应性极其广泛，可以提取包括棉花、月季、拟南芥、杨树等数百种国内外试剂盒提取失败的样品。
6). 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280 典型的比值高达 2.1～2.2，基本无 DNA 残留,可用于 RT-PCR，Northern-blot 和各种实验。
5. 注意事项：
1). 所有的离心步骤均可在室温完成（
4℃离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2). 需要自备乙醇，研钵(可选)。
3). 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
4). 裂解液RLT和RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5). 关于DNA 的微量残留:
一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase消化也无法做到100%无残留），本公司的 EASYspin Plus RNA 提取产品，由于采取了独特的缓冲体系和基因组 DNA 清除柱技术，绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase消化，可直接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup)，请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I柱上消化处理。购买DNA酶柱上消化试剂盒(货号：RN34)前可先索取具体操作说明书。
6. 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：
第一次使用前请先在漂洗液RW 瓶加入指-定量无水乙醇!
1). 直接研磨法（提取简单植物样品推荐此法，但是简单样品也可以用液氮研磨法）:
a. 新鲜植物组织称重后取 100mg-200mg 迅速剪成小块放入研钵（冰冻保存或者液氮保存样品可直接称重后取 100mg-200mg 放入研钵），加入 10 体积（1ml） RLT 和1 体积（100μl） PLANTaid 室温下充分研磨成匀浆，注意应该迅速研磨让组织和裂解液RLT 立刻充分接触以抑制RNA 酶活性。
注：PLANTaid 是提取多糖多酚次级代谢产物色素含量丰富的困难样品不可缺少成分。
b. 将裂解物转入离心管，剧烈摇晃振荡 15 秒，13,000rpm 离心 5-10 分钟，沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid。
c. 取 480μl 裂解物上清（在不超过基因组 DNA 清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
d. 立刻接操作步骤的步骤 3)。
2). 液氮研磨法（提取复杂，易降解样品时推荐此法）:
a.取 500μl 裂解液 RLT，转入 1.5ml 离心管中，加入 50μl PLANTaid 混匀备用。
b. 液氮中研磨适量植物组织成细粉后，取 50mg-100mg 细粉转入上述装有 RLT和PLANTaid 的离心管, 立即用手剧烈振荡 20 秒，充分裂解。
c. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30 秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。
d. 将裂解物 13,000 rpm 离心 5-10 分钟，沉淀不能裂解的碎片和结合有多糖多酚的PLANTaid。
e. 取裂解物上清（在不超过基因组 DNA 清除柱能力的情况下可以取更多的上清，这样可以提高产量）转到一个新离心管。加入上清体积一半的无水乙醇(0.5 体积)，此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程，立即吹打混匀,不要离心。
f. 立刻接操作步骤的步骤 3)。
3). 将混合物(每次小于 720μl，多可以分两次加入)加入一个基因组清除柱中，（清除柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 2 分钟，弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。
4). 将基因组DNA 清除柱子放在一个干净2ml 离心管内（不用RNAse free 或者DEPC处理，一般干净的新离心管即可。也可使用 RNA 吸附柱配套的新的干净收集管），在基因组清除柱内加 500μl 裂解液 RLT Plus，13,000 rpm 离心 30 秒，收集滤液（RNA 在滤液中），用微量移液器较精确估计滤过液体积（通常为 450-500μl 左右，滤过时候损失体积应该减去），加入 0.5 倍体积的无水乙醇，此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。
5). 立刻将混合物(每次小于 720μl，多可以分两次加入)加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm 离心 2 分钟，弃掉废液。确保离心后液体全部滤过去，膜上没有残留，如有必要，可以加大离心力和离心时间。
6). 加 700μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1 分钟，13,000rpm 离心 30 秒，弃掉废液。
7). 加入 500μl 漂洗液 RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），13,000 rpm 离心 30 秒，弃掉废液。加入 500μl 漂洗液 RW，重复一遍。
8). 将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
9). 取出吸附柱RA，放入一个 RNase free 离心管中，根据预期 RNA 产量在吸附膜的中间部位加 30-50μl RNase free water（事先在 70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置 1 分钟，12,000 rpm 离心 1 分钟。
10). 如果预期 RNA 产量>30μg，加 30-50μl RNase free water 重复步骤 9，合并两次洗液，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要 RNA 浓度高)。洗脱两遍的 RNA 洗脱液浓度高，分两次洗脱合并洗脱液的 RNA 产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。
