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琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒
物品单位 价格 品牌
200 Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:100 次
  • 货号:CSDR0401
  • 发布日期: 2022-05-11
  • 更新日期: 2022-05-12
产品详细说明
产地 China
保存条件 室温储存
品牌 Chemstan
货号 CSDR0401
检测方法
CAS编号
保质期 12 个月
规格 100 次
适应物种
检测限
数量
用途范围 Research Grade
标记物
纯度 %
样本
应用
是否进口
适用范围:

适用于琼脂糖凝胶DNA回收


试剂盒储存、稳定性:
本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果。
储存事项:
1.所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在 37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。
2.储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。
3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH 值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:
在高离序盐存在的情况下,DNA 片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除,最后低盐、高 pH 值的洗脱缓冲液将纯净 DNA 从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.溶胶液加酚红调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测 pH 值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
4.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将 pH缓冲在最佳结合范围内。
5.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
注意事项:
1.所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如 Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2.溶胶液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
3.回收纯化的DNA-片段一般在100bp到40kb之间,过长、过短片段的回收效率迅速降低。
4.回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA-片断大小有关。一般1-15μg,100bp-5kb的DNA-片段,回收率可高达85%。
5.切胶回收时,紫外灯观察对DNA-片段有损坏作用,应该尽可能使用能量低的长波紫外线,并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。
6.洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗
7.脱,但应该确保pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱,DNA-片段应该保存在-20℃。DNA-片段如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
关于平衡液的使用:
1.介绍:核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团,提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液,若不小心碰到,请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖,以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成,请加热至 37℃使沉淀完全消失。
2.使用方法:取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中,吸取 100μl 的平衡液至柱子中。13000 rpm 离心 1 分钟,倒掉收集管中废液,将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。
操作步骤:
提示:第一次使用前请先在漂洗液 WB 中加入指-定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1.在长波紫外灯下,用干净刀片将所需回收的 DNA 条带切下,尽量切除不含 DNA的凝胶,得到凝胶体积越小越好。
2.将切下的含有 DNA 条带凝胶放入 1.5ml 离心管,称重。先称一个空 1.5ml 离心管重量,然后放入凝胶块后再称一次,两次重量相减,得到凝胶的重量。
3.加 3 倍体积溶胶液 DD。如果凝胶重为 100mg,其体积可视为 100μl,则加入 300μl 溶胶液。如果凝胶浓度大于 2%,应加入 6 倍体积溶胶液。4.56℃水浴放置 10 分钟(或直至胶完全溶解)。每 2-3 分钟涡旋震荡一次帮助加速溶解。


5.可选,一般不需要:每 100mg 最初的凝胶重量加入 150μl 的异丙醇,震荡混匀。有时候加入异丙醇可以提高回收率,加入后不要离心。回收大于 4Kb 的片段时,不加入异丙醇,加入有时反而可能降低回收效率。

平衡液预处理吸附柱:

使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤,具体方法参见前文“关于平衡液的使用”。
6.将上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中(吸附柱放入收集管中),室温放置 1 分钟,12,000rpm 离心 30-60 秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积超过 750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱 EC 中。过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后,溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色,此为酚红 pH 指示剂碱性条件下的正常颜色变化。
7.加入 600μl 漂洗液 WB (请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心 30秒,弃掉废液。
8.加入 600μl 漂洗液 WB,12,000rpm 离心 30 秒,弃掉废液。
9.将吸附柱 EC 放回空收集管中,12,000rpm 离心 2 分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10. 取出吸附柱 EC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加 50μl 洗脱缓冲液 EB(洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置 2 分钟,12,000rpm 离心 1 分钟。如果需要较多量 DNA,可将得到的溶液重新加入吸附柱中,离心 1 分钟。洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要 DNA 浓度较高,可以适当减少洗脱体积, 但是最小体积不应少于 25μl,体积过小降低 DNA 洗脱效率,减少产量。



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