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TRUEscript SYBR Green qRT-PCR Kit (+gDNA Eraser)
物品单位 价格 品牌
1330 Chemstan
  • 产地:China
  • 型号:100 rxn
  • 货号:CSQP0611
  • 发布日期: 2022-05-11
  • 更新日期: 2022-05-13
产品详细说明
产地 China
保存条件 -20℃ 保存
品牌 Chemstan
货号 CSQP0611
检测方法
CAS编号
保质期 12 个月
规格 100 rxn
适应物种
检测限
数量
用途范围 Research Grade
标记物
纯度 %
样本
应用
是否进口

产品储存

-20℃ 保存,有效期 12 个月

制品说明

本产品是一种高效、稳定、快速并可以去除基因组 DNA 污染的反转录系统。试剂盒采用分子进化技术多点突变的新一代反转录酶,大幅度提高了稳定性和反转录效率。本试剂盒为一管式反转录预混 Mix,5 × TRUE RT MasterMix II 中含有反转录第一链合所需的所有试剂(TRUEscript HˉRTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer)。 通常Real Time RT-PCR 等实验需要先用 DNase I 消化去除 RNA 中残留的基因组 DNA(gDNA) ,但是传统 DNase I 处理复杂并容易造成 RNA 的降解和损失。本试剂盒中使用了具有 DNA 分解活性的特殊 4 ×gDNA Eraser Mix 2 分钟消除 gDNA 残留,不需要 DNase 消化和后续繁琐步骤。

适用范围

第一链cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

产品特点
1. 新一代反转录酶大幅度提高了稳定性和反转录效率。
2. 采用gDNA Eraser仅需2分钟清除DNA残留,不需要DNase 消化和后续繁琐步骤。
3. 全预混的反转录Mix,只需加入RNA和水,15分钟简单快速完成反转录。
4. 同时2种Mix在-20℃不易冻结,减少了化冻和混匀时间,使用更简单。
5. 本产品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率,最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。
操作步骤 (以20 μl反应体系为例,也可以采用10μl反应体系)
1. 将模板RNA和5 × TRUE RT MasterMix II在冰上解冻;4 × gDNA Eraser Mix和RNase free H2O在室温(15-25℃)解冻,解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀,可简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
2. 在RNAse free管里面加入以下成分:(建议使用PCR管冰上配制)
Components                                                             Volume
Total RNA/mRNA                                                      ≤ 12 μl *
4 × gDNA Eraser Mix                                        4 μl (见注意事项 3)

RNase free H2O                                             to 16 μl(补足到总体积 16 μl)

* Total RNA 建议不超过 2 μg,mRNA 不超过 200 ng (20μl 体系)
3. 移液器轻轻吹打混匀,42℃孵育2分钟(或者37℃孵育5分钟)。控温步骤均建议PCR仪器上进行。
4. 继续直接在同一管加入如下成份:
Components                                                              Volume

5 × TRUE RT MasterMix II                                 4 μl (见注意事项 3)

5. 移液器轻轻吹打混匀(总体积20 μl)
如使用mRNA模板是来源于真核细胞(如人、小鼠的组织细胞)含有Poly(A)尾结构,42℃孵育15-20min。
如使用mRNA模板是来源于原核细胞(细菌)或者病毒等不含Poly(A)尾结构,25℃孵育10 min,42℃孵育15-20min。
注意:如果模板具有复杂二级结构或高GC区域,可尝试将反应温度提高至50℃,有助于提高产量。
6. 85℃加热 5 sec 失活TRUEscript Hˉ RTase和gDNA Eraser。
7. 得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应,或在-20℃保存,并在半年内使用;长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。RT-qPCR
取适量反转录cDNA产物(一般不超过qPCR反应体积的1/10)作为qPCR模板,按照厂家荧光定量PCR试剂说明书进行下一步荧光定量PCR。 如果表达基因含量丰富,可以根据实际适当稀释cDNA模板使用。
注意事项
1. 避免RNase污染。
2. 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
3. 4 × gDNA Eraser Mix 、5 × TRUE RT MasterMix II 非常粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心后使用,并且避免吸头外壁沾附损失。4 × gDNA Eraser Mix 和5 × TRUE RT MasterMixII内包含的酶均为过量,即使每次按照3.6 μl-3.8 μl使用,也不影响使用效果。
4. 可以不经过基因组去除步骤,直接用5 × TRUE RT MasterMix II进行反转录。

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