产品概述

本产品是使用 Probe 探针法进行 qPCR 反应的专用预混液。核心组分 Q3 Taq DNA Polymerase 为一种新型的热启动 DNA 聚合酶，具有特异性强、检测灵敏度高等诸多优点，配合针对 qPCR 优化的最适 buffer，可以有效抑制非特异性扩增，从而显著提高扩增效率，适用于进行高灵 敏度的 qPCR 反应。本产品是一种 2×预混试剂，可以在宽广的定量区域内得到良好的标准 曲线，靶基因定量准确、重复性好、可信度高。

适用机型

适用机型：本产品使用独特的 ROX Passive Reference Dye，适用于市面上所有类型的荧光 定量 PCR 仪（无 ROX 校正机型；低浓度 ROX 校正机型；高浓度 ROX 校正机型)，无 需在不同的仪器上调整 ROX 的浓度。包括如下机型：Applied Biosystems 5700，7000， 7300，7700，7900，7900HT，7900HT Fast，StepOne™，StepOnePlus™，7500，7500 Fast，ViiA™7，BioRad CFX96™，CFX384™，iCycler iQ™，iQ™5，MyiQ™， MiniOpticon™，Opticon®，Opticon 2，Chromo4™，Qiagen/Corbett Rotor-Gene® Q，RotorGene® 3000，Rotor-Gene® 6000，Stratagene MX4000™，MX3005P™，MX3000P™， Eppendorf Mastercycler® ep realplex，realplex 2s， Roche Applied Science LightCycler™ 480；以及市场上常见的其他荧光定量 PCR 仪。

保存条件

-20 °C 避光保存；Master Mix 解冻后可于 2 ~ 8 °C 避光条件下稳定存放 6 个月。(Master mix 解冻后可能出现些许白色沉淀，室温放置片刻并上下颠倒，沉淀即会溶解。请确认沉淀完全溶 解，并充分混匀后使用。 )

质量控制

纯度检测：所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶、核酸残留。

功能检测：以质粒或 HeLa 细胞总 RNA 逆转录产物的稀释液为模板，扩增 5 个基因，扩增 曲线批次内相近。

实验流程（以 ABI StepOnePlus™为测试机型）

1. 在 qPCR 管中配制如下混合液

反应体系中各成分的量可根据以下原则自行调整：

a.—般来说反应体系中引物终浓度为 0.2 mM 即可得到较好的扩增效果。当反应性能比较差时，可以在终浓 度范围内（0.1-1.0 μM）调整引物浓度。

b.qPCR 灵敏度极高，建立反应体系时加入模板量的准确程度对最终定量结果会有很大的影响。推荐将模板 稀释后加入反应体系中，这样可以有效提高实验的重复性。

c.如模板类型为未稀释 cDNA 原液，使用体积不应超过 qPCR 反应总体积的 1/10。

2. 按下列条件进行 qPCR 反应

TanMan 探针设计指南

1. 探针序列应尽量接近正向或者反向引物，但是不能与之有重合区域。

2. 探针长度一般为 18-40 bp。

3. 应避免连续相同碱基出现，特别是要避免 GGGG 或者更多连续的 G 出现。

4. 探针 5’端应避免使用碱基 G。

5. 探针的退火温度应为 65-67 ℃。 6. 如果序列中包含多态性位点，应使其位于探针序列中间。