产地 | China |
品牌 | Tolo Bio |
货号 | CC96101 |
用途范围 | Research Grade |
纯度 | % |
规格 | 10 ×100ul |
是否进口 | 否 |
产品简介
本品为使用大肠杆菌 DH10B 菌株制备的高效化学感受态细胞,转化效率可达 108 cfu/μg DNA,被 广泛用于质粒转化、基因克隆等;可以使用蓝白斑筛选。
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存
产品特性
来源于 MC1061 菌株,可用于基因克隆等;
rpsL 突变赋予 DH10B 菌株链霉素抗性;
蓝白斑筛选时,需在平板上预先涂布 IPTG 和 X-gal;
mcrA、mcrBC 及 mrr 突变使 DH10B 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA ;
由于 recA1 和 endA1 的突变,因此该菌株的重组率较低,有利于插入 DNA 的稳定,故常用于克隆 质粒的保存和高纯度质粒 DNA 的提取
质量控制
无外源质粒 DNA 残留;
化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA。
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰水浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90 s 后,立刻置于冰水浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。
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