产地 | China |
品牌 | Tolo Bio |
货号 | CC96136 |
用途范围 | Research Grade |
纯度 | % |
规格 | 10 ×100ul |
是否进口 | 否 |
产品简介
DH10Bac 菌株主要用于生产重组杆状病毒分子(Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统)。该菌株中含有父 本 bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124;其中, bMON14272 中包含 mini-F 复制子, 卡那抗性基 因, attTn7 位点和 lacZα 互补因子;而辅助质粒 pMON7124 含有 tnsABCD 区,可表达转座蛋白来帮助把 供体质粒上的 mini-Tn7 插入到父本的 bacmid 上的靶标位点。当 DH10Bac 感受态细胞转化了在多克隆 位点克隆了外源片段的供体质粒(如 pFastBac)时,该菌株可生成复合 bacmid。DH10Bac 菌株携带 ?80lacZΔM15 突变,因此可用于蓝白斑筛选实验。经 pUC19 质粒转化检测,DH10Bac 感 受态细胞的转化效率可达 108 cfu/μg DNA。
存储条件
-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。
质量控制
无外源质粒 DNA 残留
化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC19 DNA
使用方法
1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,置于冰浴中融化;
2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中,轻轻弹匀,冰上孵育 30 min;
3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中,不要晃动,热激 90s 后,立刻置于冰浴中静置 2-3 min;
4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基(室温或 37 ℃预热),后置于 37 ℃摇床复壮 45 min;
5. 取不同体积的转化产物,用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上,于 37 ℃培养箱培养过夜。
注意事项
1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用;
2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;
3. 加入待转化 DNA 后,不要用移液器吹吸感受态细胞,仅用手指轻弹即可;
4. 为确保最高转化效率,整个操作过程中除热激外均要保持低温,并且要尽量轻柔。
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