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GV3101(pSoup-19) 化学感受态细胞
物品单位 价格 品牌
240 Tolo Bio
  • 产地:China
  • 型号:10 ×100ul
  • 货号:CC96303
  • 发布日期: 2022-06-13
  • 更新日期: 2022-06-14
产品详细说明
产地 China
品牌 Tolo Bio
货号 CC96303
用途范围 Research Grade
纯度 %
CAS编号
规格 10 ×100ul
是否进口

产品简介

p19 蛋白来源于番茄丛矮病毒,可抑制宿主对外源基因的 RNA 沉默效应,提高异源基因转录本的稳定 性,进而促进异源蛋白的表达,广泛应用于转基因植物及烟草叶片,拟南芥叶片,番茄叶片或原生质体 的瞬时表达系统中。GV3101 菌株为 C58 型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 Rif,为 了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 (pTiC58DT-DNA),此质粒 含有 vir 基因,pMP90 (pTiC58DT-DNA)型 Ti 质粒含有筛选标签:Gent,赋予 GV3101 菌株庆大霉素抗 性;在 GV3101 菌株中转入 help 质粒:pSoup-p19 即为 GV3101(pSoup-p19)菌株,可帮助 pGreen,62SK, pGs2 等质粒在农杆菌中复制,同时赋予该菌株四环素(Tet)抗性。适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆 等植物的转基因操作。本公司生产的 GV3101(pSoup-p19)化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pGs2(卡 那霉素抗性)质粒检测转化效率≥ 103 cfu/μg DNA。

存储条件

-80 ℃保存;请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

质量控制

除胭脂碱型 Ti 质粒 pMP90 和 pSoup-p19 质粒外,无外源质粒 DNA 残留;

化学法转化效率≥103 cfu/μg DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出,在手心融化成冰水混合物,置于冰水浴中;

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μl 感受态细胞中,用手拨打管底混匀,依次于冰上静置 10 分钟、液氮 5 分钟(或干冰乙醇浴和-80℃冰冻)、37℃水浴 5 分钟、冰浴 5 分钟;

3.加入 900 μl 无抗生素的 YEB 液体培养基,于 28 ℃振荡培养 2~3 小时;

4. 6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 YEB 平板 上,倒置放于 28 ℃培养箱培养 2-3 天(当平板只含有 50 μg/ml Kan 时,28 ℃培养 48 h 即可;平板中 同时加入 50 μg/ml Kan,20 μg/ml Rif 时,需 28 ℃培养 60 h;如果使用的平板含有 50 μg/ml Rif 则需要 28 ℃培养 72-90 h)。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用;

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10;

3. 利福平浓度不应高于 25 μg/ml,利福平浓度过高不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。

4. 由于 Ti 质粒丢失的概率极低(可以忽略),所以相关抗性基因可以不用添加; 5. 经本公司测试,该感受态具有氨苄抗性,建议勿使用带氨苄抗性的载体。

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